[發明專利]一種伊枯草菌素A水劑及其制備方法與應用

無效

• 申請號: 201310455184.6
• 申請日: 2013-09-29
• 公開（公告）號: CN103478146A
• 公開（公告）日: 2014-01-01
• 發明（設計）人: 劉常宏;蔡勛超;薛雅蓉;劉京蘭
• 申請（專利權）人: 南京大學
• 主分類號: A01N43/90
• 分類號: A01N43/90;A01P3/00
• 代理公司: 南京知識律師事務所 32207
• 代理人: 胡錫瑜

一、技術領域

本發明屬于生物農藥技術領域，具體涉及一種伊枯草菌素A水劑及其制備方法與應用。?

二、背景技術

人口與糧食問題是21世紀人類面臨的重要挑戰之一。世界主要糧食作物和經濟作物每年因病害損失達20%(Oerke?et?al.2004)。中國的情況至少在10%～15%之間，如果完全不使用農藥，正常年份的黃瓜損失約為蘿卜為40%、甘藍為25%、蘋果為30%、甜菜為24%(陳萬義1998)?

然而，由于化學農藥的大量使用和不正確使用，在獲得較大經濟社會效益的同時，也給農業生產帶來了一系列問題，如3R問題，即害蟲抗藥性(Resistance)、殘留(Residue)、害蟲再猖獗(Resurgence)(金衛根2002)。另外，化學農藥的生物毒性、研制新品種的費用昂貴以及環境相容性差等缺點也日趨嚴重(Leroux1996)。因此，開發研制更加安全、高效、環境友好的農藥制劑已成為農藥行業發展的必然趨勢。?

相對于化學農藥，生物農藥最大的優勢在于能克服化學農藥對生態環境的污染和減少在農副產品中農藥殘留量，是提高我國農產品國際市場競爭力的關鍵因素之一。目前使用最多的生物農藥是微生物農藥，包括以菌體為有效成分的殺菌劑類以及以微生物代謝產物為有效成分的農用抗生素類（如井岡霉素、瀏陽霉素等）。其中研究和應用較多的是芽孢桿菌，如枯草芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌等。芽孢桿菌能夠合成多種抗菌物質，如短肽和環脂肽，其中環脂肽（伊枯草菌素）是該類細菌最重要的殺菌成分之一。然而由于芽孢桿菌代謝產物中該類物質較少，目前尚無環脂肽類殺菌劑產品。?

本發明報道一種利用樟樹內生菌解淀粉芽孢桿菌CC09代謝產物(Cai?et?al.2013)生產的新殺菌劑——伊枯草菌素A水劑及其在防治小麥白粉病中的應用。?

三、發明內容

本發明需要解決的問題是利用分離自樟樹莖桿的內生菌，開發一種可以用于植物白粉病防治的髙效、安全、環境友好、可產業化生產的微生物農藥制劑。本發明提供來源于解淀粉芽孢桿菌CC09的伊枯草菌素A水劑的制備工藝；提供伊枯草菌素A水劑在防治小麥白粉病中的應用及使用方法。?

本發明采用的細菌是內生細菌解淀粉芽孢桿菌CC09(Bacillus?amyloliquefaciens?CC09)(以下簡稱為CC09菌株)，該菌株已申請發明專利“一種防治植物病害的生防菌及其制備方法(專利授權號：ZL201110073773.9)”及“利用RNA聚合酶突變提高環脂肽類抗生素產量的突變體及制法和應用(專利授權號：ZL201110386416.8)“。?

本發明所述伊枯草菌素A水劑是CC09菌株發酵液經離心去除菌體后的上清液，經大孔樹脂吸附濃縮后所得的浸膏與自來水和助劑按一定比例配制所得的穩定均一溶液，該溶液的抗菌活性物質為CC09菌株所產生的環脂肽類物質——伊枯草菌素A。?

本發明所述的伊枯草菌素A水劑具有廣譜抗植物病原真菌作用，如尖孢鐮刀菌、大豆炭疽、立枯絲核和鏈格孢菌等。盆栽防病實驗證明，伊枯草菌素A水劑對小麥白粉病有很高的防效，并且該制劑具備工業化生產的基本要求。?

本發明所述的伊枯草菌素A水劑在防治黃瓜白粉病或大豆炭疽病或小麥白粉病或小麥赤霉病或葡萄白粉病多種植物真菌病害農藥上具有巨大潛力?？芍苽涑煞乐吸S瓜白粉病或大豆炭疽病或小麥白粉病或小麥赤霉病或葡萄白粉病多種植物真菌病害的新生物農藥。?

本發明所述的伊枯草菌素A水劑的制備方法如下：?

(1)CC09菌株發酵液離心去除菌體，所得上清液用X-5大孔樹脂吸附濃縮，樹脂與上清液的體積比為1：100，流速為4ml/min，洗脫溶劑為95%的乙醇，流速4ml/min，洗脫液用旋轉蒸發儀減壓濃縮至干，即得含伊枯草菌素A的活性浸膏（以下簡稱活性浸膏）。?

(2)稱取10g活性浸膏，溶解于適量水中，然后依次加入苯甲酸鈉0.2g、正戊醇2.0ml、乙二醇2.0ml、纖維素鈉1.0g和苯磺酸鈉0.5g，使其終濃度分別為0.2%、2%、2%、1%和0.5%，補充水至100ml，再用2M的NaOH調節pH至8.5，即為伊枯草菌素A水劑，該水劑中伊枯草菌素A的含量為0.58mg/ml。貯存于棕色細口瓶中。?

本發明的優點及效果：CC09菌株為樟樹內生細菌，具有發酵工藝簡單、抗菌有效成分含量較高和環境安全的優勢，而且具有廣譜抗菌活性，可用于多種植物病害的防治，尤其對白粉病有較高的預防和治療作用。?

四、具體實施方式