[發明專利]蠶絲支架、制備方法、應用以及三相蠶絲韌帶移植物、制備方法

有效

• 申請號: 201310454976.1
• 申請日: 2013-09-27
• 公開（公告）號: CN103505762A
• 公開（公告）日: 2014-01-15
• 發明（設計）人: 范宏斌;李宏國;孫立國;郭征;薛英森;張涌泉
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第四軍醫大學
• 主分類號: A61L27/38
• 分類號: A61L27/38;A61L27/36;A61L27/56
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司 61200
• 代理人: 汪人和

1.一種蠶絲支架，其特征在于：該蠶絲支架包括具有微孔結構的蠶絲支架本體，所述蠶絲支架本體沿縱向依次劃分為第一過渡區、韌帶重建中心區和第二過渡區，第一過渡區以及第二過渡區沿橫向依次劃分為韌帶重建邊緣區、軟骨修飾區以及骨修飾區，韌帶重建中心區以及韌帶重建邊緣區均采用絲素蛋白進行修飾，軟骨修飾區采用明膠、透明質酸鈉以及硫酸軟骨素進行修飾，骨修飾區依次采用絲素蛋白以及羥基磷灰石進行修飾。

2.根據權利要求1所述一種蠶絲支架，其特征在于：所述蠶絲支架本體采用網狀蠶絲支架制備而成。

3.一種如權利要求1所述蠶絲支架在制備韌帶移植物中的應用。

4.一種蠶絲支架的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）將蠶絲用編織機編織成孔徑為2-4mm的網狀蠶絲支架；

2）將網狀蠶絲支架的一側表面沿縱向依次劃分為第一過渡區、韌帶重建中心區和第二過渡區，將第一過渡區以及第二過渡區沿橫向依次劃分為韌帶重建邊緣區、軟骨修飾區以及骨修飾區；

3）于室溫下使用質量分數為1.8-2.0%的絲素蛋白溶液將韌帶重建中心區、韌帶重建邊緣區以及骨修飾區浸透，同時，采用溶質為明膠、透明質酸鈉以及硫酸軟骨素的溶液將軟骨修飾區浸透，然后將網狀蠶絲支架于-15～-30℃下靜置0.5～2小時，靜置后于-60～-90℃再靜置0.5～2小時；

4）經過步驟3）后，將網狀蠶絲支架進行真空冷凍干燥；

5）經過步驟4）后，將韌帶重建中心區、韌帶重建邊緣區以及骨修飾區均用體積分數90%的甲醇水溶液浸泡8-15min，浸泡后將網狀蠶絲支架放入干燥箱干燥或自然風干，然后在骨修飾區制備羥基磷灰石涂層。

5.根據權利要求4所述一種蠶絲支架的制備方法，其特征在于，所述蠶絲在編織前進行脫絲膠處理，或者，用未脫絲膠的蠶絲進行編織，在步驟2）之前將編織得到的網狀蠶絲支架進行脫絲膠處理。

6.一種三相蠶絲韌帶移植物，其特征在于：包括卷折為柱狀的蠶絲支架、韌帶細胞、軟骨細胞和成骨細胞，所述蠶絲支架包括具有微孔結構的蠶絲支架本體，蠶絲支架本體的一側表面依次劃分為第一過渡區、韌帶重建中心區和第二過渡區，第一過渡區和第二過渡區分別位于柱狀的蠶絲支架的兩端，第一過渡區以及第二過渡區沿蠶絲支架的卷折方向依次劃分為韌帶重建邊緣區、軟骨修飾區以及骨修飾區，韌帶細胞位于韌帶重建中心區和韌帶重建邊緣區，軟骨細胞位于軟骨修飾區，成骨細胞位于骨修飾區。

7.根據權利要求6所述一種三相蠶絲韌帶移植物，其特征在于：所述蠶絲支架本體采用網狀蠶絲支架制備而成，所述韌帶重建中心區以及韌帶重建邊緣區均采用絲素蛋白進行修飾，軟骨修飾區采用明膠、透明質酸鈉以及硫酸軟骨素進行修飾，骨修飾區依次采用絲素蛋白以及羥基磷灰石進行修飾。

8.一種三相蠶絲韌帶移植物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）將蠶絲用編織機編織成孔徑為2-4mm的網狀蠶絲支架；

2）將網狀蠶絲支架的一側表面沿縱向依次劃分為第一過渡區、韌帶重建中心區和第二過渡區，將第一過渡區以及第二過渡區沿橫向依次劃分為韌帶重建邊緣區、軟骨修飾區以及骨修飾區；

3）使用鈷60照射對網狀蠶絲支架消毒，然后將韌帶細胞種植于韌帶重建中心區和韌帶重建邊緣區，將軟骨細胞種植于軟骨修飾區，將成骨細胞種植于骨修飾區，韌帶細胞、軟骨細胞以及成骨細胞采用0.8-1.5×10⁵個細胞/cm²的濃度進行種植；

4）待種植的細胞黏附于網狀蠶絲支架后，將網狀蠶絲支架沿其橫向按照從韌帶重建邊緣區到軟骨修飾區再到骨修飾區的次序進行卷折，制成柱狀的韌帶移植物。

9.根據權利要求8所述一種三相蠶絲韌帶移植物的制備方法，其特征在于，所述蠶絲在編織前進行脫絲膠處理，或者，用未脫絲膠的蠶絲進行編織，在步驟2）之前將編織得到的網狀蠶絲支架進行脫絲膠處理。

10.根據權利要求8所述一種三相蠶絲韌帶移植物的制備方法，其特征在于，所述步驟3）之前，對韌帶重建中心區、韌帶重建邊緣區、軟骨修飾區以及骨修飾區進行修飾，修飾的具體方法為：

第一步，于室溫下使用質量分數為1.8-2.0%的絲素蛋白溶液將韌帶重建中心區、韌帶重建邊緣區以及骨修飾區浸透，同時，采用溶質為明膠、透明質酸鈉以及硫酸軟骨素的溶液將軟骨修飾區浸透，然后將網狀蠶絲支架于-15～-30℃下靜置0.5～2小時，靜置后于-60～-90℃再靜置0.5～2小時；

第二步，經過第一步后，將網狀蠶絲支架進行真空冷凍干燥；

第三步，經過第二步后，將韌帶重建中心區、韌帶重建邊緣區以及骨修飾區均用體積分數90%的甲醇水溶液浸泡8-15min，浸泡后將網狀蠶絲支架放入干燥箱干燥或自然風干，然后在骨修飾區制備羥基磷灰石涂層。