[發(fā)明專利]一種利用3基因聚合效應(yīng)選育山羊產(chǎn)羔性狀的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310454718.3
• 申請日: 2013-09-27
• 公開（公告）號: CN103525921A
• 公開（公告）日: 2014-01-22
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 曹斌云;安小鵬;侯金星;王建剛;宋宇軒
• 申請（專利權(quán)）人: 西北農(nóng)林科技大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 西安恒泰知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所 61216
• 代理人: 李鄭建

1.一種利用3基因聚合效應(yīng)選育山羊產(chǎn)羔性狀的方法，其特征在于，以山羊基因組DNA為模板，在PCR條件下，利用3對引物P1、P2和P3，分別擴增干細(xì)胞因子（SCF）基因的3'非翻譯區(qū)，III型跨膜酪氨酸激酶受體（KIT）基因外顯子7和親吻素（KISS1）基因的內(nèi)含子1，其中：

所述的引物P1如下：

上游引物1F：5'-CCTCAGAAGTGAAGGTGCAGAGTCC-3'；

下游引物1R：5'-CAATGAGGACCAGTCATGTGCCAG-3'；

所述的引物P2如下：

上游引物2F：5'-GGTAGGTGATCCACAGGT-3'；

下游引物2R：5'-TGGTCAGCGAATTGTAGG-3'；

所述的引物P3如下：

上游引物3F：5'-CCCGCTGTAACTAGAGAAAG-3'；

下游引物3R：5'-CATCCAGGGTGAGTGATACT-3'；

引物P1擴增干細(xì)胞因子（SCF）基因的3'非翻譯區(qū)，用于篩查山羊干細(xì)胞因子（SCF）基因的3'非翻譯區(qū)位點的突變；

引物P2擴增III型跨膜酪氨酸激酶受體（KIT）基因外顯子7，用于篩查山羊III型跨膜酪氨酸激酶受體（KIT）基因外顯子7位點的突變；

引物P3擴增親吻素（KISS1）基因的內(nèi)含子1，用于篩查山羊親吻素（KISS1）基因內(nèi)含子1位點的突變；

用濃度為1.5%的瓊脂糖凝膠電泳對3對引物擴增產(chǎn)物進行大小判定，然后采用DNA測序技術(shù)篩查到干細(xì)胞因子（SCF）基因的3'非翻譯區(qū)，III型跨膜酪氨酸激酶受體（KIT）基因外顯子7和親吻素（KISS1）基因的內(nèi)含子1共有3個堿基的突變；

再利用濃度為10%聚丙烯酰胺凝膠和濃度為3.5%瓊脂糖凝膠電泳對這3個位點的SNPs進行基因分型和基因頻率分析，分析不同基因型組合與山羊產(chǎn)羔數(shù)之間的關(guān)系，挑選最佳的基因型組合，分析擁有最佳基因型組合個體的選配方式，應(yīng)用這些選配方式形成山羊多羔的多基因聚合良種核心群。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的PCR擴增的條件是：

15μL反應(yīng)體系：包括DNA模板50ng，7.5μl2×Taq?MasterMix，10μM的上下游引物各0.3μl，加滅菌水至15μl；

PCR反應(yīng)程序如下：

1）利用引物P1的PCR反應(yīng)程序為：95℃預(yù)變性5min，94℃變性30s，63℃退火30s，72℃延伸35s，共進行35個循環(huán)，最后72℃充分延伸10min，4℃保存；

2）利用引物P2的PCR反應(yīng)程序為：95℃預(yù)變性5min，94℃變性30s，56℃退火30s，72℃延伸35s，共進行35個循環(huán)，最后72℃充分延伸10min，4℃保存；

3）利用引物P3的PCR反應(yīng)程序為：95℃預(yù)變性5min，94℃變性30s，51℃退火30s，72℃延伸35s，共進行35個循環(huán)，最后72℃充分延伸10min，4℃保存。

3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的干細(xì)胞因子（SCF）基因的3'非翻譯區(qū)在17025bp存在C→A的突變；所述的III型跨膜酪氨酸激酶受體（KIT）基因外顯子7在88430bp存在T→A的突變；所述的親吻素（KISS1）基因的內(nèi)含子1在2124bp存在T→A的突變。

4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的基因分型是用濃度為10%的聚丙烯酰胺凝膠和濃度為3.5%的瓊脂糖凝膠電泳分析引物P1、P2和P3的PCR擴增產(chǎn)物，結(jié)果如下：

引物P1位點：純合型CC在17025bp位的堿基是C，雜合型CA在17025bp位的堿基是C/A，純合型AA在17025bp位的堿基是A；

引物P2位點：純合型TT在88430bp位的堿基是T，雜合型TA在88430bp位的堿基是T/A，純合型AA在88430bp位的堿基是A；

引物P3位點：純合型TT在2124bp位的堿基是T，雜合型TA在2124bp位的堿基是T/A，純合型AA在2124bp位的堿基是A。

5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的最佳基因型組合為C22（CCTTTT）；產(chǎn)羔數(shù)最低的基因型組合為C5（CATTAA）。

6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的不同基因型組合對山羊產(chǎn)羔數(shù)的影響為：

C22（CCTTTT）組合基因型個體第2和4胎產(chǎn)羔數(shù)顯著高于C2（CATAAA）和C5（CATTAA）型個體；C22（CCTTTT）組合基因型個體第3胎和平均胎次的產(chǎn)羔數(shù)顯著高于C1（AAAAAA）、C2（CATAAA）、C3（CCTAAA）和C5（CATTAA）型個體；C5（CATTAA）組合基因型個體平均胎次的產(chǎn)羔數(shù)顯著低于C12-C15和C17-C22型個體。