[發明專利]一種核酸檢測方法

無效

• 申請號: 201310454256.5
• 申請日: 2013-09-29
• 公開（公告）號: CN104513849A
• 公開（公告）日: 2015-04-15
• 發明（設計）人: 王阿慧
• 申請（專利權）人: 上海滿益科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 無
• 代理人: 無

發明領域?

本發明涉及分子生物學領域，尤其是涉及一種核酸檢測方法。

發明背景

目前的準則規定，存在于重組治療性蛋白質的核酸量小于10?pg的每日劑量的重組蛋白的DNA。因此，用于檢測核酸的量極低的方法是必要的。這種方法也將得到廣泛的使用，法醫樣品中的DNA的定量。?已經描述的核酸檢測的低水平的幾種方法。第一種方法是基于經典的雜交技術。此方法利用放射性標記的核酸探針結合到感興趣的DNA。然而，這種方法有幾個缺點，包括再現性差，產生大量廢試劑，引起的非特異性結合的高背景水平。此外，這種技術用于確定低量的未知序列的DNA的存在通常是不適當的?檢測核酸的第二種方法利用能夠插入到核酸的熒光染料。然而，如清潔劑，蛋白質和脂質的許多干擾物質影響通過該方法產生的信號的再現性，?利用生物素化的檢測的DNA的水平低的第三種方法的單鏈DNA結合蛋白（SSB），鏈霉抗生物素蛋白，抗稠合到脲酶DNA抗體，以及作為試劑的生物素化的硝化纖維素。此法是市售Kung等分子器件和描述，皮克總DNA定量使用SNA-結合蛋白在硅基于傳感器的系統，肛交。生物化學。187：220-27（1990）。該試劑盒的操作，允許將要形成一個復雜的的鏈霉抗生物素蛋白，生物素，SSB，抗DNA抗體一起孵育。然后將復合體上的生物素化的過濾器捕獲，洗滌，讀取捕獲的脲酶的量。此方法是高度敏感的，但是有幾個缺點。這些缺點包括昂貴的試劑和廣泛的控制的需要。?第四種方法包括解聚或降解核酸和檢測由熒光素酶的ATP。多核苷酸聚合酶的核酸在細胞中的合成負責。這些酶也能夠德意志和Kornberg，脫氧核糖核酸酶催化合成，生物化學雜志中所描述的催化其它反應?；瘜W?244（11）:3019-28（1969）。很多，但不是全部，聚合酶能夠解聚磷酸鹽或焦磷酸鹽存在下，無論是在核酸?的美國專利。第4735897號描述了一種方法，檢測的多聚腺苷酸化，信使RNA（聚（A）-mRNA的）。解聚的聚（A）-mRNA的磷酸鹽的存在已被證實會導致在形成ADP，它可以被轉換為ATP由丙酮酸激酶或肌酸磷酸激酶。RNA也可通過核糖核酸酶消化AMP，腺苷酸激酶轉化為ADP，然后轉換為ATP的丙酮酸激酶?的ATP這樣生產的熒光素酶檢測系統檢測。在ATP和O2的存在下，熒光素酶催化熒光素的氧化作用，產生光，然后可以使用光度計定量。其他反應的副產物是AMP的磷酸鹽，焦磷酸鹽和氧合蟲熒光素，?ATP的產生在所有的生物體中的酶的存在下，也允許使用熒光素酶系統的，用于檢測污染細胞的存在或量的樣品中，如描述在美國專利。第5648232號。例如，可能會增加ADP懷疑含有污染細胞的樣品。轉換的ADP轉化為ATP酶的細胞的熒光素酶測定法檢測，如上所述。這種方法的缺點是相對不穩定的ADP襯底，?這是本領域需要的是可靠的，成本效益的方法，核酸，細胞，細胞物質在多種類型的樣品的檢測非常低的水平。本發明公開了新穎的方法，用于檢測的DNA，RNA和細胞數量低。這些方法利用焦磷酸或核酸酶降解的新穎的組合，轉換為ATP的dNTPs，直接向ATP，AMP的轉化，擴增的ATP敏感性增加，寡核苷酸探針的解聚，和優化的反應條件。?

發明內容

核酸和多孔材料與ATP的檢測系統檢測的極低量的方法和組合物進行了描述。?背景?生產大量的重組蛋白質的方法是眾所周知的。重組蛋白行業的發展，出現了各種質量控制檢測的需要。一個例子是需要重組蛋白抽提物中存在的核酸的定量分析。