[發明專利]豬繁殖與呼吸綜合征病毒保護劑及其使用方法

無效

• 申請號: 201310453461.X
• 申請日: 2013-09-29
• 公開（公告）號: CN103484435A
• 公開（公告）日: 2014-01-01
• 發明（設計）人: 李春梅;周慶豐;潘永飛;王東東
• 申請（專利權）人: 廣東溫氏食品集團股份有限公司
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;C12N1/04;C12R1/93
• 代理公司: 廣州市深研專利事務所 44229
• 代理人: 陳雅平

技術領域

本發明涉及細胞病毒學及獸用疫苗學，具體涉及一種豬繁殖與呼吸綜合征病毒保護劑及其使用方法。

背景技術

豬繁殖與呼吸綜合征(Porcine?reproductive?and?respiratory?syndrome，PRRS)又稱“豬藍耳病”，是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒?(PRRSV)引起的豬的一種急性、熱性、接觸性傳染病，不同年齡、品種和性別的豬均能感染，但以妊娠母豬和1月齡以內的仔豬最易感，以繁殖障礙、呼吸困難、耳朵藍紫、并發其他傳染病為主要特征?(馬紅艷，郝永清，豬繁殖與呼吸綜合征的研究，畜牧與飼料科學，2007，28(4)：43-45)。該病從20世紀80年代后期出現以來，已給全球的養豬業造成嚴重的經濟損失(吳佳俊等，豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗研究進展，中國預防獸醫學報，2010，32(8)：655-658)。2006年4月，我國南方地區暴發了一種以持續高熱、食欲廢絕、身體發紺、藍耳、腹瀉為特征，高發病率和高死亡率，傳播迅速的高致病性藍耳病(Highly?pathogenic?PRRS，HP-PRRS)，波及全國25個省份，經濟損失巨大，研究證明引發該病的主要病原是高致病性PRRSV，鑒于該病的嚴重危害性，我國于2008年底在新修訂的《一、二、三類動物疫病病種名錄》中將其列為一類動物疫病(韋天超，2009)。

為了有效地控制高致病性豬繁殖與呼吸綜合征，該病發生后，國內迅速開展對該病毒的研究，疫苗是防控該病的主要技術手段，雖然已有多種商品化的疫苗面世，但由于該PRRSV是單股RNA病毒，具有極強的變異性，毒株間存在顯著的抗原差異性，交叉保護性差，故要不斷檢測研究該病毒的變化，更新疫苗。而PRRSV病毒的穩定性受pH和溫度的影響較大，在pH小于5或大于7的條件下，其感染力降低95%以上（寧宜寶，《獸用疫苗學》中國農業出版社）。為了更好地研究該病毒及生產出有效疫苗，就要做大量的動物實驗，重復性實驗，為保持實驗的準確性科學性，病毒的保存很重要。

凍干是保存病毒較好的方式，但在實驗室的研究和田間試驗階段，凍干批量大成本高，很沒有必要。而一般是直接置于-20℃或-70℃冰箱凍存病毒液，病毒液的主要成分是含NaHCO₃的培養基，NaHCO₃在空氣中易分解成CO₂溢出而使溶液變堿，從而使病毒容易凋亡；另外培養基中還含有大量氨基酸等營養物質，容易分解使培養液性質改變，最終導致保護效果較差，病毒感染力下降較快，影響實驗的準確性。

發明內容

本發明要解決的技術問題是如何提供一種病毒保護劑以便更好地保存PRRSV，使其在實驗研究過程中或保存時保護病毒使其病毒含量下降減緩。

本發明的技術方案如下：

一種豬繁殖與呼吸綜合征病毒保護劑，該保護劑由蔗糖、PVP-K30和磷酸鹽緩沖液（PBS）組成。

優選地，所述的豬繁殖與呼吸綜合征病毒保護劑中，所述的磷酸鹽緩沖液，pH值在7.0~7.4之間。

優選地，所述的豬繁殖與呼吸綜合征病毒保護劑中，所述蔗糖的濃度大于5%(w/v)。

優選地，所述的豬繁殖與呼吸綜合征病毒保護劑中，所述PVP-K30的濃度大于2%(w/v)。

優選地，所述的豬繁殖與呼吸綜合征病毒保護劑中，所述磷酸鹽緩沖液為每1000mL超純水中溶解氯化鈉8.0～8.5g；氯化鉀0.2g；十二水合磷酸氫二鈉3.58～3.63g或無水磷酸氫二鈉1.44～1.56g；以及磷酸二氫鉀0.2～0.24g，用HCl或NaOH調pH值為7.0～7.4配制而成。

優選地，所述的豬繁殖與呼吸綜合征病毒保護劑中，所述每1000mL超純水中溶解氯化鈉8g、氯化鉀0.2g、十二水合磷酸氫二鈉3.63g以及磷酸二氫鉀0.24g。

更優選地，所述的豬繁殖與呼吸綜合征病毒保護劑中，所述蔗糖的濃度大于5%(w/v)，所述PVP-K30的濃度大于2%(w/v)。

更優選地，所述的豬繁殖與呼吸綜合征病毒保護劑，經過121℃高壓滅菌20~30min。

本發明還提供了以上所述豬繁殖與呼吸綜合征病毒保護劑的使用方法，是將該保護劑與含病毒培養液（即病毒液）按100:1~10:1的體積比混合后保存。

優選地，所述的豬繁殖與呼吸綜合征病毒保護劑的使用方法，是通過添加磷酸鹽緩沖液調節保護劑與含病毒培養液的混合液中蔗糖的終濃度為5%(w/v)，PVP-K30的終濃度為2%(w/v)。

與現有技術相比，本發明具有以下有益效果：