[發(fā)明專利]一種基因芯片的金沉積檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310451535.6
• 申請日: 2013-09-27
• 公開（公告）號: CN103451313A
• 公開（公告）日: 2013-12-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 景奉香;賈春平;張冀申;王文濤;金慶輝;趙建龍
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院上海微系統(tǒng)與信息技術(shù)研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司 31002
• 代理人: 潘振甦

1.一種基因芯片的金沉積檢測方法，其特征在于所述方法包括將已知的DNA序列點(diǎn)樣到微陣列上制備基因芯片，在待測核酸的5’端預(yù)先修飾一種生物大分子，以及在納米金上標(biāo)記與待測核酸上修飾分子匹配的另一生物大分子構(gòu)建納米金復(fù)合探針，然后將修飾好的待測核酸和標(biāo)記好的所述納米金復(fù)合探針與所述基因芯片混合，孵育，洗去未反應(yīng)的所述納米金復(fù)合探針，加入雙氧水金增強(qiáng)反應(yīng)液觀察。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的金沉積檢測方法，其特征在于，所述雙氧水金增強(qiáng)反應(yīng)液的組成為：次氯金酸HAuCl·3H₂O1～100mM、雙氧水0.5～4M，明膠的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為1～10%。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的金沉積檢測方法，其特征在于，所述雙氧水金增強(qiáng)反應(yīng)液的組成為：次氯金酸HAuCl·3H₂O10mM、雙氧水1.5M，明膠的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為4%。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的金沉積檢測方法，其特征在于，在待測核酸的5’端上預(yù)先修飾的生物大分子包括：核酸序列、生物素、地高辛或熒光素中的一種。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的金沉積檢測方法，其特征在于，在納米金上標(biāo)記的與待測核酸上修飾分子匹配的另一生物大分子包括：核酸序列、鏈親合素、抗地高辛抗體或抗熒光素抗體中的一種。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的金沉積檢測方法，其特征在于，納米金上標(biāo)記核酸序列時(shí)，所述核酸序列為兩種長度的DNA探針GP1和GP2，且GP1的堿基長度比GP2長10個(gè)堿基以上。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的金沉積檢測方法，其特征在于，當(dāng)納米金的尺寸為5～40nm時(shí)，GP1與GP2的比例在1∶4～1∶30之間。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的金沉積檢測方法，其特征在于，具體的檢測步驟為：

1）采用芯片點(diǎn)樣儀將5’端氨基修飾的DNA探針點(diǎn)陣于醛基化修飾芯片表面制備基因芯片，置于密閉空間固定，所述DNA探針序列為：

分枝桿菌通用探針：5’-NH₂-ggactgagatacggcc-3’；

結(jié)核分枝桿菌探針：5’-NH₂-cacgggatgcatgtct-3’；

龜分枝桿菌探針：5’-NH₂-ccacacacttcatggtga-3’；

胞內(nèi)分枝桿菌探針：5’-NH₂-gacctttaggcgcatg-3’；

2）PCR擴(kuò)增獲得標(biāo)記有生物素的DNA分子，其中，引物的序列為：

16s1：5’-Biotin-gataagc(c/t)tgggaaactg-3’；

16s2：5’-Biotin-tgcctcccgtaggagtctgg-3’；

3）通過K₂CO₃將納米金溶液調(diào)pH值至6，加入鏈親和素溶液，混勻，再加入聚乙二醇溶液，離心，洗去未標(biāo)記上的鏈親和素，制得標(biāo)記有鏈親合素的納米金復(fù)合探針；

4）取所述步驟2）中制備的經(jīng)過標(biāo)記的DNA分子，滴于所述步驟1）中制備的基因芯片的點(diǎn)樣區(qū)，雜交，洗去未雜交的DNA分子，然后將所述步驟3）中制備的標(biāo)記好的納米金復(fù)合探針滴于芯片點(diǎn)樣區(qū)，反應(yīng)30～60min，洗液清洗去除未反應(yīng)的納米金復(fù)合探針；

5）將雙氧水金增強(qiáng)反應(yīng)液滴在點(diǎn)陣區(qū)，室溫靜置，肉眼或顯微鏡下觀察。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的金沉積檢測方法，其特征在于，所述步驟2）中還包括采用納米金重懸液重懸標(biāo)記好的核酸納米金生物復(fù)合探針，所述納米金重懸液的組成為：牛血清白蛋白0.25～10%、聚乙烯吡咯酮0.1～1%、蔗糖1.5～10%、聚乙二醇0.01～1%、吐溫0.2～1%，以上組成均為質(zhì)量百分?jǐn)?shù)。