[發明專利]人卵透明帶蛋白4中的表位肽及其應用

有效

• 申請號: 201310451354.3
• 申請日: 2013-09-27
• 公開（公告）號: CN103524601A
• 公開（公告）日: 2014-01-22
• 發明（設計）人: 徐萬祥;顧少華;賽提旭·古普塔;王健;唐海平;季朝能;何亞萍;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海市計劃生育科學研究所;復旦大學
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;G01N33/68;A61K39/00;A61P15/18
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 祝蓮君;劉真真

技術領域

本發明屬于生物工程和免疫學技術領域，具體地，涉及一組人卵透明帶蛋白4中的表位肽及其應用。

背景技術

ZP蛋白(人卵透明帶蛋白)，包括組成蛋白之一的ZP4蛋白，在精卵受精過程中也起者重要的作用，是精子第二受體。在正常婦女血清中抗ZP抗體一般為陰性，而抗ZP抗體的存在會結合ZP蛋白，使精子的運動能力下降，影響精子穿過宮頸粘液及上行，并影響精子和ZP蛋白的結合，從而阻止精卵結合并導致不孕。在發生ZP自身免疫的不孕癥婦女中，血清中存在抗ZP蛋白抗體，但由于ZP蛋白抗原的不可獲得性，現有一般檢測抗原多用與人ZP具交叉反應性的豬ZP蛋白，故目前對抗人ZP抗體的檢測存在較高的假陽性率。

而在轉化醫學領域，建立特異、靈敏的疾病診斷方法一直是重要研究方向之一。在一般用18或20聚長表位肽抗原的酶聯免疫測定法(ELISA)診斷自身免疫疾病以及諸如流感病毒感染的場合，往往出現30%左右的假陽性率，從而影響臨床診斷的準確性和所建立診斷方法的廣泛應用。

造成此種場合高假陽性率的原因很簡單，即：由于已清楚線性表位由3-8個氨基酸殘基組成，18或20聚或更長的合成肽(太短不易作為抗原包被ELISA檢測板)中顯然有可能存在N個不被知曉的表位，以及由于病毒和細菌自然感染(如流感病毒感染等)和自身免疫疾病等諸多原因導致人體內通常存在成千上萬種但抗體滴度不高的抗體，因此這兩個因素在以上患者血清稀釋度不可能高(一般1:20-1:100)的情況下，極易產生非特異性交叉反應，從而導致高假陽性率檢測結果。

另外，基于一旦發生人ZP自身免疫疾病，暴露在ZP蛋白表面的抗原表位都會產生它們的抗體這一認知，因此解碼靶蛋白的線性抗原表位組顯得尤為重要，因為如此就能知曉人ZP可誘發多少和哪些ZP表位抗體，進而據此構建可替代天然ZP蛋白(由ZP1-ZP4四個蛋白組成)重組多表位肽抗原，以解決ZP抗體檢測的抗原來源和檢測ZP抗體的特異性和靈敏度等問題，也包括為研制安全可逆和有效的人ZP避孕疫苗提供盡可能多的線性抗原表位肽。

發明內容

本發明提供了一組可聯合應用于檢測抗人ZP4蛋白抗體，從而診斷婦女ZP自身免疫不孕病因的ZP4蛋白小分子表位肽，本發明還提供了該組表位肽在制備避孕疫苗中的應用。

本發明第一方面，提供了一種來自人卵透明帶蛋白-4(人ZP4蛋白)227位-463位的分離的短肽，所述短肽的結構如式I所示：

X1-X-X2

式I，

并滿足以下特征：

(a)式I中X為6-7個氨基酸的核心片段；

(b)式I中X1、X2為無、1或2個氨基酸，且X1和X2氨基酸個數總和≤2；

(c)所述的核心片段的序列選自SEQ?ID?NO.:1-6；和

(d)所述的短肽具有與抗人ZP4C抗體結合的活性；

其中，“-”表示肽鍵或肽接頭。

在另一優選例中，所述的短肽選自如SEQ?ID?NO.:7-18所示的短肽。

本發明第二方面，提供了一種多肽，所述多肽是經本發明第一方面所述的短肽經過1-3個氨基酸的添加、1-2個缺失并仍含有所述核心片段X，且具有與抗人ZP4C抗體結合活性的多肽。

本發明的第三方面，提供了一種分離的肽集合，所述的肽集合由選自下組的肽或多肽構成：(i)一種或多種選自本發明第一方面所述的短肽；和/或(ii)一種或多種選自本發明第一方面所述的多肽。

在另一優選例中，(i)中所述短肽與(ii)中所述多肽的核心片段X的序列可以相同或不相同。

在另一優選例中，(i)中所述各短肽的核心片段X的序列可以相同或不相同。

在另一優選例中，(ii)中所述各多肽的核心片段X的序列可以相同或不相同。

在另一優選例中，所述的肽集合還包括除SEQ?ID?NO.:1-6以外的分離的人ZP4蛋白線性表位肽。

本發明第四方面，提供了本發明第三方面所述肽集合的用途，用于制備檢測抗人ZP4蛋白抗體的試劑或試劑盒，其中，所述的試劑或試劑盒用于診斷是否由ZP自身免疫導致的婦女不孕。

在另一優選例中，所述的試劑點樣于試劑盒檢測板中。

在另一優選例中，所述的試劑包括肽集合或偶聯于載體蛋白的肽集合。

在另一優選例中，所述的載體蛋白包括GST蛋白。

在另一優選例中，所述的檢測包括酶聯免疫反應法(ELISA法)檢測。