[發(fā)明專利]一種Clec3b基因敲除打靶載體在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201310451259.3 | 申請日： | 2013-09-27 |
| 公開（公告）號： | CN103525850A | 公開（公告）日： | 2014-01-22 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 王爾松;田恒利 | 申請（專利權(quán)）人： | 上海市第六人民醫(yī)院 |
| 主分類號： | C12N15/65 | 分類號： | C12N15/65;C12N15/63 |
| 代理公司： | 上海申新律師事務(wù)所 31272 | 代理人： | 竺路玲 |
| 地址： | 200233 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 clec3b 基因 打靶 載體 | ||
1.一種Clec3b基因敲除打靶載體的構(gòu)建方法，其特征在于，所述方法包括：
在Clec3b基因外顯子1的前后各引入一個(gè)loxP位點(diǎn)，其中，一個(gè)為獨(dú)立的loxP位點(diǎn)，另一個(gè)帶有Neomycin標(biāo)記（Neo）；通過重組導(dǎo)入載體中。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法步驟為：
PCR擴(kuò)增5’和3’同源臂，BAC轉(zhuǎn)化至EL350，進(jìn)行同源重組；
在第一個(gè)位置插入floxP-Neo-loxP片段；然后切除loxP位點(diǎn)的floxed?Neo標(biāo)記，余下一個(gè)loxP；
在第二個(gè)loxP位置插入loxP/FRT-NeFRT片段，構(gòu)建完成。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，所設(shè)計(jì)的5’同源臂（5’arm）和3’同源臂（3’arm）引物P1-P4如下：
P1：5’-GGGCGGTGCTCTTTCCATTAGTT-3’
P2：5’-CTGAGCCCAGAAAGCGAAGGA-3’
P3：5’-GTGCCACTCCCACTGTCCTTTCC-3’
P4：5’-TTCCTCTGTGACTGGCCCGACTCC-3’
其中，P1和P2擴(kuò)增2.7kb的5’同源臂，P3和P4擴(kuò)增3.8kb的3’同源臂。
4.一種如權(quán)利要求1所述的方法制備的Clec3b基因敲除打靶載體。
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