[發明專利]一種普通鐮刀菌、制備降粘酶的方法及其應用

有效

• 申請號: 201310451257.4
• 申請日: 2013-09-27
• 公開（公告）號: CN103525709A
• 公開（公告）日: 2014-01-22
• 發明（設計）人: 趙海;靳艷玲;方揚;黃玉紅
• 申請（專利權）人: 中國科學院成都生物研究所
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N9/00;C12P7/06;C12R1/77
• 代理公司: 成都賽恩斯知識產權代理事務所(普通合伙) 51212
• 代理人: 張帆;許軼

1.普通鐮刀菌CBS131819，保藏于CBS-KNAW，保藏號為CBS131819，保藏日期為2012年1月27日。

2.根據權利要求1所述的普通鐮刀菌CBS131819在制備降粘酶中的應用。

3.根據權利要求1所述的普通鐮刀菌CBS131819的篩選方法，其特征在于：腐爛的甘薯塊莖制成菌懸液，經梯度稀釋后接種至篩選培養基，30℃培養3d，PDA培養基分離培養，30℃培養7d，剛果紅染液染色，挑選出黃色透明圈大且明顯的菌株；所述篩選培養基為（g/L）：木聚糖10，酵母膏4.5，(NH4)₂SO₄4.5，NaCl5.0，K₂HPO₄2.0，MgSO₄·7H₂O0.4，瓊脂15，pH6.0。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于：所述菌懸液制備是將甘薯塊莖5g于100mL三角瓶，加入20mL無菌水，室溫180rpm，30min，得到菌懸液；所述梯度稀釋是按照經典的涂布稀釋平板法，經梯度稀釋后，分別取100μL10^-5，10^-6，10^-7濃度的菌懸液涂布于篩選培養基上。

5.一種降粘酶制備方法，其特征在于：將普通鐮刀菌CBS131819接種于發酵培養基，30℃、130rpm下培養4d～5d，制得降粘酶粗酶液；所述發酵培養基是如下二種之一：

發酵培養基一（g/L）：風干玉米芯20、蛋白胨3.0、酵母膏0.5、KH₂PO₄2.0、(NH₄)₂SO₄1.5、MgSO₄·7H₂O0.15、CaCl₂0.3、FeSO₄·7H₂O0.0005、ZnSO₄·7H₂O0.0014、MnSO₄·H₂O0.0016、COCl₂·6H₂O0.0016、Tween-803.3、pH5.0；

發酵培養基二（g/L）：風干玉米芯20、KH₂PO₄2.0、NH₄NO₃4.5、MgSO₄·7H₂O0.15、CaCl₂0.3、FeSO₄·7H₂O0.0005、ZnSO₄·7H₂O0.0014、MnSO₄·H₂O0.0016、COCl₂·6H₂O0.0016、Tween-803.3、pH6.5。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于：所述發酵培養天數為5d。