[發(fā)明專利]一種以鮮活大青葉為原料制備靛玉紅的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310451101.6
• 申請(qǐng)日: 2013-09-29
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103509835A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-01-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊大堅(jiān);陳新滋;陳士林;卞兆祥;呂愛(ài)平;徐宏喜;陳國(guó)慶;張毅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 重慶市中藥研究院;香港浸會(huì)大學(xué);中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所;上海中醫(yī)藥大學(xué)
• 主分類號(hào): C12P17/16
• 分類號(hào): C12P17/16;C07D209/36
• 代理公司: 重慶輝騰律師事務(wù)所 50215
• 代理人: 武小赟

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種中藥材活性成分的制備、提取方法，更具體的說(shuō)涉及一種以鮮活大青葉為原料制備靛玉紅的方法。

技術(shù)背景

大青葉是我國(guó)的傳統(tǒng)中藥，為十字花科植物菘藍(lán)Isatis?indigotica?Fortune的干燥葉，同時(shí)商品中也常采用蓼科植物蓼大青Polygonum?tinctirium?Lour；爵床科植物馬藍(lán)Baphicacanthus?cusia?fNees)Bremek.和馬鞭草科植物路邊青Clerodendron?cyrtophyllum?Turcz.作為大青葉的代用品。菘藍(lán)的根和葉，具有清熱解毒、涼血、消斑的功效，主治溫病發(fā)熱、發(fā)斑、發(fā)疹、風(fēng)熱感冒、咽喉腫痛、流行性腦脊髓膜炎、乙型腦炎、肝炎、腮腺炎、丹毒、痛腫等癥，是治療感冒常用的大宗藥材。大青葉(菘藍(lán)葉)中的主要成分有菘藍(lán)苷（isatan?B）、菘藍(lán)苷易水解為靛玉紅（indirubin）和靛藍(lán)（indigo），色胺酮（trptanthrin）、β-谷留醇、二十九烷、苯甲酸、臨位氨基苯甲酸、在大青葉的全株中還含有芥苷（glucobrassicin）、新芥苷（neoglucobrassicin）、1-磺基苷（1-sulpho-3-indolylmethyl?glucosinolate）、吲哚醇、1-硫氰酸-2-羥基-3丁烯（1-thiocy?a?no-2-hydroxy-3-butene）、腺苷（adenosine）、棕櫚酸、γ-谷甾醇等，天門冬氨酸、蘇氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、蛋氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、組氨酸、賴氨酸及高含量的鐵和錳。據(jù)報(bào)道，在大青葉的四個(gè)品種中都含有靛藍(lán)、靛玉紅，其中，菘藍(lán)葉中菘藍(lán)苷B(isatanB，有的也稱大黃素B和靛紅烷B)含量最高，據(jù)報(bào)道最高含量達(dá)到1%。

靛玉紅又名炮彈樹(shù)堿B，分子量為：262.26；分子結(jié)構(gòu)式為：

靛玉紅為一種雙吲哚類生物堿；對(duì)多種移植性動(dòng)物腫瘤有抑制作用，能破壞白血病細(xì)胞；在其作用下，變性的細(xì)胞多呈腫脹、溶解性壞死。實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，靛玉紅還能增強(qiáng)動(dòng)物的單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)的吞噬能力，靛玉紅為我國(guó)首創(chuàng)的新型結(jié)構(gòu)的抗白血病藥物。目前國(guó)內(nèi)用于研究的靛玉紅有3中來(lái)源：即從中藥大青葉、青黛中提取的天然產(chǎn)物，半合成、全合成的靛玉紅。

發(fā)明內(nèi)容

為了提高從大青葉（菘藍(lán)）中提取靛玉紅的收率，本發(fā)明提供了一種在大青葉鮮品原料中直接半合成靛玉紅的方法；同時(shí)在提取時(shí)將菘藍(lán)原藥材中已經(jīng)存在的靛玉紅一并提取出來(lái)方法。

本發(fā)明中將菘藍(lán)苷（靛紅烷B）轉(zhuǎn)化為靛玉紅的原理是：

1）菘藍(lán)苷在加熱條件下的不穩(wěn)定性；

2）菘藍(lán)苷屬于酯類。在堿性條件下容易水解；

3）游離出來(lái)的吲哚酚陽(yáng)離子在厭氧條件下不會(huì)氧化為吲哚酚自由基；

在上述原理的基礎(chǔ)上，本發(fā)明直接在粉碎鮮活大青葉菘藍(lán)原料原料中添加吲哚醌，使吲哚酚和吲哚醌反應(yīng)縮合成為靛玉紅。化學(xué)反應(yīng)方程式如下：

但是本反應(yīng)存在一個(gè)副反應(yīng)，因?yàn)榈寮t烷B屬于酯類，堿性條件下易水解。其在內(nèi)源酶的作用下發(fā)生水解反應(yīng)，生產(chǎn)吲哚酚陽(yáng)離子，在有氧的條件下，吲哚酚陽(yáng)離子會(huì)氧化為吲哚酚自由基，吲哚酚自由基的生成由原浸泡液中的溶解氧供氧即可，吲哚酚自由基可能縮合成為靛藍(lán)；但是進(jìn)一步氧化生成的吲哚滿二酮?jiǎng)t需要外界額外供氧。化學(xué)反應(yīng)方程式如下：

因此，體系pH的控制與酶解時(shí)通氧與否是使反應(yīng)生成何種靛的關(guān)鍵。若使產(chǎn)靛向著靛玉紅方向進(jìn)行，則在酶解過(guò)程中，通過(guò)通氧氣、調(diào)高pH等手段促進(jìn)吲哚滿二酮的生成，若向著靛藍(lán)方向進(jìn)行，則應(yīng)在酶解過(guò)程中控制氧氣含量和體系pH，防止吲哚滿二酮的生成，故體系含氧量和pH與生成何種靛密切相關(guān)。

以鮮活大青葉為原料制備靛玉紅的方法的具體內(nèi)容是：

1）采收12ｈ內(nèi)的鮮活大青葉中添加藥材重量2-5倍的水，粉碎，粉碎的漿液能過(guò)目篩，制備得到提取原漿；

2）在提取原漿中添加如吲哚醌，充分?jǐn)嚢瑁{(diào)pH值大于7，所述的調(diào)pH值大于7為向反應(yīng)液中添加石灰水；加熱，反應(yīng)大于30min后，過(guò)濾，收集水液，在該步驟中可以向原漿中充入惰性氣體，排除其中的氧氣；

3）用氯仿、一氯甲烷、二氯甲烷、四氯甲烷或乙酸乙酯中的一種或幾種的混合物，加熱，萃取水液，收集合并有機(jī)相；

4）回收有機(jī)相，上氧化鋁柱，洗脫，純化得到靛玉紅粗品。所述的上氧化鋁柱，洗脫為：