[發明專利]一種用于選育阿勒泰羊產肉性能的分子標記方法及其應用

有效

• 申請號: 201310450634.2
• 申請日: 2013-09-29
• 公開（公告）號: CN103525920A
• 公開（公告）日: 2014-01-22
• 發明（設計）人: 劉武軍;王瓊;邵勇鋼;劉玲玲;馬海玉;于茜
• 申請（專利權）人: 新疆農業大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種用于選育阿勒泰羊產肉性能的分子標記方法，其特征在于，具體方法步驟如下：

(1)阿勒泰羊基因組DNA提取：采集阿勒泰羊血樣5ml，提取DNA，在-20℃保存；0.8％瓊脂糖凝膠電泳檢測，經溴化已錠染色后，于凝膠成像儀紫外燈下照射，觀察條帶的大小和亮度，判斷DNA的提取質量；

(2)阿勒泰羊MyoD1基因特異性引物設計：利用綿羊MyoD1基因的DNA序列(GenBank登錄號：NM_001009390)，自行人工設計兩對特異性引物，兩對特異性引物序列分別為：

引物1：

上游引物F：5′-CCGCTGTTTACTGTGGG-3′；

下游引物R：5′-GCTGGTTTGGGTTGCT-3′；

引物2：

上游引物F：5′-AGCAACCCAAACCAGC-3′

下游引物R：5′-ATGCCGTCGGAACAGT-3′；

(3)阿勒泰羊MyoD1基因的PCR擴增：根據設計的兩對引物，特異性擴增阿勒泰羊MyoD1基因的兩個片段；PCR反應體系為：Mi?x10.0μl，上下游引物各0.4μl，DNA模板1.5μl，加水至總體積20μl；反應條件為：94℃預變性5mi?n，94℃變性30s、退火溫度30s、72℃延伸1mi?n，循環31次，72℃延伸5mi?n，4℃保存；特異性擴增的兩個PCR產物均由1％瓊脂糖凝膠電泳檢測，經溴化已錠染色后，于凝膠成像儀紫外燈下照射，觀察擴增帶的大小和亮度，判斷PCR產物擴增質量；

(4)SSCP檢測：分別對阿勒泰羊MyoD1基因的兩個PCR產物進行SSCP檢測，篩選具有多態性的PCR擴增片段；取3μl?PCR產物與7μl的98％去離子甲酰胺的變性劑混合，98℃變性10min后冰浴10min，使之保持變性狀態；變性后PCR產物用8％非變性聚丙烯凝膠(polyacrylamide?gel，PAG)180V電泳20h，銀染顯色后，于凝膠成像儀白光下照射，觀察條帶的大小，判斷有無多態性，有多態的判斷基因型；

(5)DNA測序，找出阿勒泰羊MyoD1基因突變位點；對于SSCP檢測中具有多態性的基因，將其不同基因型的PCR產物進行DNA測序，用以判斷突變堿基和位點；

(6)突變堿基與阿勒泰羊產肉量進行關聯分析，確定影響阿勒泰羊產肉量的DNA分子標記，并對阿勒泰羊中多態基因不同基因型間的個體體重進行顯著性檢驗；經顯著性檢驗，P＜0.01時差異極顯著；P＜0.05時差異顯著；P＞0.05時差異不顯著；若差異顯著或極顯著，則說明導致基因擴增片段出現多種基因型的突變堿基是顯著影響阿勒泰羊產肉量的基因突變位點，該多態基因可作為影響決定阿勒泰羊產肉量的DNA分子標記。

2.如權利要求1所述的用于選育阿勒泰羊產肉性能的分子標記方法在提高阿勒泰羊的產肉性能中的應用，其特征在于，淘汰基因型為TT或TC的阿勒泰羊個體，留用基因型為CC的阿勒泰羊個體，以此來選育提高新疆阿勒泰羊的產肉量。