[發(fā)明專利]棉酚的新應(yīng)用

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310449320.0
• 申請(qǐng)日: 2013-09-27
• 公開（公告）號(hào): CN103655526A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 錢程遠(yuǎn);王東;隋江東;李夢(mèng)俠
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)第三附屬醫(yī)院
• 主分類號(hào): A61K31/11
• 分類號(hào): A61K31/11;A61P35/00
• 代理公司: 北京集佳知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 趙青朵;馮瓊

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及棉酚的新應(yīng)用，尤其涉及棉酚作為APE1抑制劑的應(yīng)用及其在制備治療癌癥的輔助劑或化療增敏劑中的應(yīng)用。?

背景技術(shù)

隨著生活水平的提高及環(huán)境污染的加重，惡性腫瘤的發(fā)病率有逐年上升的趨勢(shì)，目前已被臨床界定為常見病、多發(fā)病，嚴(yán)重威脅了人類的健康。脫嘌呤脫嘧啶核酸內(nèi)切酶/氧化還原因子（Apurinic?aprimidinic?endonuclease1/Redox?factor-1，APE1/Ref-1）是生物大分子功能復(fù)合體的范例，一方面APE1具有DNA修復(fù)活性，它作為AP核酸內(nèi)切酶，是DNA堿基切除修復(fù)（base?excision?repair，BER）途徑的主要限速酶之一；另一方面APE1還可通過其獨(dú)有的氧化還原功能調(diào)控關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子的DNA結(jié)合活性，所述關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子包括NF-κB，AP-1，HIF-1α，Egr-1，p53，PEBP2，Myb及Pax5、Pax8等。這些轉(zhuǎn)錄因子的激活需要其DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域—關(guān)鍵半胱氨酸殘基維持還原狀態(tài)，而APE1則通過改變這些活性位點(diǎn)的氧化還原狀態(tài)，發(fā)揮“基因開關(guān)”的作用。因此，APE1是連接DNA堿基切除修復(fù)、轉(zhuǎn)錄因子的氧化還原調(diào)控和氧化應(yīng)激等重要生物學(xué)效應(yīng)的橋梁，對(duì)細(xì)胞的存活有著至關(guān)重要的意義。?

目前，研究發(fā)現(xiàn)APE1在多種腫瘤中的表達(dá)均高于正常組織，利用免疫組織化學(xué)和Western?blot等方法進(jìn)行定量研究，結(jié)果表明在多種惡性腫瘤組織中APE1的表達(dá)水平明顯升高（其高表達(dá)率在72%～90%），其中惡性腫瘤組織包括肝癌、骨肉瘤、多發(fā)性骨髓瘤、淋巴瘤、大腸癌、非小細(xì)胞肺癌、卵巢癌、腦膠質(zhì)瘤和宮頸癌等。經(jīng)證實(shí)，APE1的高表達(dá)可能是腫瘤發(fā)生的早期事件，其表達(dá)強(qiáng)度的改變與腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展密切相關(guān)，而且，APE1高表達(dá)與骨肉瘤、腦膠質(zhì)瘤和非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后不良密切相關(guān)。此外，越來越多的研究結(jié)果表明用siRNA敲除腫瘤細(xì)胞內(nèi)源性的APE1能增加細(xì)胞對(duì)DNA損傷劑的敏感性，所述DNA損傷劑包括甲磺酸甲酯（MMS）、替莫唑胺（TMZ）、依托泊苷、博來霉素、順鉑及電離輻射。相反，腫瘤細(xì)胞內(nèi)過表達(dá)APE1則可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞對(duì)放化療的抵抗。新近有研究顯示APE1在乳腺癌干細(xì)胞中高表達(dá)，?可能與腫瘤放化療耐藥和干細(xì)胞的生物學(xué)功能密切相關(guān)，也顯示APE1是腫瘤治療的良好靶標(biāo)。以上研究充分說明，APE1是腫瘤治療潛在重要靶點(diǎn)之一。?

大量植物提取物和天然產(chǎn)物及其衍生物中存在大量具有清熱解毒和抗氧化的成分，采用生物傳感器測(cè)定和虛擬分子對(duì)接的方法發(fā)現(xiàn)，中藥中確實(shí)存在一些與APE1氧化還原功能域藥物活性位點(diǎn)具有較強(qiáng)親和力的組分。這也可能是很多中藥和保健食物發(fā)揮抗癌效用的重要原因。因此，從天然產(chǎn)物中尋取APE1氧化還原功能的抑制劑，逐漸成為抗癌手段的一個(gè)新的重要途徑。?

棉酚（Gossypol）是錦葵科植物草棉、樹棉或陸地棉成熟種子、根皮中提取的一種多元酚類物質(zhì)，其結(jié)構(gòu)如式I。棉酚作為一種公認(rèn)的男性節(jié)育藥，已受到國內(nèi)外學(xué)者廣泛關(guān)注。然而棉酚可能是一種頗有前途的抗癌藥物被越來越多的學(xué)者所認(rèn)識(shí)。自60年代初至今已有不少有關(guān)棉酚抗腫瘤作用的報(bào)道、其中涉及棉酚抗腫瘤機(jī)制以及體外培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞、人腫瘤的動(dòng)物模型和臨床應(yīng)用等研究。但是至今尚未見到有關(guān)棉酚可抑制APE1氧化還原和DNA損傷修復(fù)功能的報(bào)道。?

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供棉酚的新應(yīng)用，即棉酚在制備APE1氧化還原功能抑制劑或APE1的DNA損傷修復(fù)功能抑制劑中的應(yīng)用。?

Cell?Counting?Kit-8簡(jiǎn)稱CCK-8試劑盒，是一種基于WST-8的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測(cè)試劑盒。WST-8是一種類似于MTT的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成橙黃色的formazan。細(xì)胞增殖越多越快，則顏色越深；細(xì)胞毒性越大，則顏色越淺。對(duì)于同樣的細(xì)胞，顏色的深淺和細(xì)胞數(shù)目呈線性關(guān)系。本發(fā)明首先通過CCK-8試劑盒考察棉酚對(duì)人宮頸癌細(xì)胞（Hela）、人肝細(xì)胞癌?（HepG2）細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果顯示，在Hela、HepG2試驗(yàn)中，棉酚對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷效應(yīng)具有時(shí)間和劑量依賴性，其IC₅₀均在50μM以下，表明棉酚對(duì)腫瘤細(xì)胞有較強(qiáng)的殺傷效應(yīng)。?