[發明專利]評估肝細胞癌預后的試劑盒及RFFL的應用

有效

• 申請號: 201310449227.X
• 申請日: 2013-09-24
• 公開（公告）號: CN103525916A
• 公開（公告）日: 2014-01-22
• 發明（設計）人: 徐江鋒;劉細玉
• 申請（專利權）人: 浙江大學醫學院附屬義烏醫院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;G01N33/574
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 周烽

技術領域

本發明涉及生物醫藥技術領域，具體而言，涉及一種評估肝細胞癌預后的試劑盒及RFFL的應用。

背景技術

肝細胞癌（Hepatocellular?carcinoma，HCC）是全球最常見的惡性腫瘤之一，發病率居惡性腫瘤第五位，為第二大腫瘤死因。而據統計我國肝癌死亡人數約占全球因肝癌死亡人數的50%。目前以肝切除術為代表的外科治療仍然是肝癌的首選治療方法，但術后5年的復發轉移率達60%，甚至更高。隨著肝臟外科技術、麻醉和圍手術期處理水平的不斷改善，使肝癌手術切除率得到了顯著的提高，肝癌手術死亡率也不斷下降。盡管如此，肝癌患者的整體治療水平仍無顯著改善，其關鍵原因是肝癌切除術后復發轉移率仍居高不下。

肝癌的預后是指預見患有肝癌的患者的各種情況，例如從肝癌中全面康復的可能性，經治療后復發的可能性，肝癌診斷后患者生存的可能性等等。這可以根據疾病的嚴重性、診斷時間、治療進展等各種情況而變化。只有根據其預后適當地應用各種治療方法時，肝癌才能夠得到有效的治療。例如，對于被評估為有良好的預后的患者，有必要避免可能對患者引起嚴重副作用的危險的治療方法，例如激進的化療或手術、放療等，而選擇那些相對溫和、保守和安全的治療方法。另一方面，對于被評估為有較差的預后的患者，應當積極地進行化療或手術，例如放療等治療方法以力圖增加生存期或生存率。

根據迄今為止進行的研究，已經發展的肝癌的預后非常糟糕，顯示了自診斷起6個月內死亡的高致死率，剩余僅四個月的平均壽命長度。但是，大小小于3?厘米的肝癌有良好的預后，且已知無需任何特別治療，一年的生存率為90％，且手術后5?年的生存率為約40～50％。然而，根據現有技術很難精確地評估肝癌患者的預后。為了精確評估預后，需要一種把患者劃分為各風險組群的分析方法。然而，迄今為止，僅僅依靠在診斷和初次手術治療時的臨床病理肝癌階段來確定預后，而沒有一種用于精確評估肝癌的方法。

因此，深入研究探討肝癌復發轉移相關的分子標志物，不僅為肝癌患者的治療和預后評估帶來益處，也可為開發新的靶向治療藥物提供依據。因此，尋找評估肝癌預后的新的分子標志物，具有重要的理論和現實意義。

發明內容

本發明旨在提供一種評估肝細胞癌預后的試劑盒及RFFL的應用，以解決現有技術中對肝細胞癌預后評估缺少有效的生物學分子標志物的技術問題。

為了實現上述目的，根據本發明的一個方面，提供了一種評估肝細胞癌預后的試劑盒。該試劑盒包括用于特異性檢測RFFL表達水平或表達模式的試劑。

進一步地，試劑包括用于特異性檢測RFFL?mRNA?表達水平或表達模式的RT-PCR引物。

進一步地，RT-PCR引物的序列為SEQ?ID?NO：1和SEQ?ID?NO：2。

進一步地，試劑用于特異性檢測RFFL所編碼的蛋白的表達水平或表達模式。

進一步地，試劑包括：用于肝癌組織標本石蠟包埋和切片的試劑，用于肝癌組織標本石蠟切片的脫蠟和水化的試劑，用于抗原修復的檸檬酸抗原修復液，用于滅活內源性過氧化物酶的雙氧水，用于封閉的封閉血清，山羊抗人RFFL蛋白多克隆抗體、辣根酶標記的兔抗山羊IgG抗體，用于顯色的DAB顯色劑和蘇木素，以及用于脫水、透明和封片的試劑。

進一步地，用于肝癌組織標本石蠟切片的脫蠟和水化的試劑包括二甲苯、乙醇及蒸餾水。

進一步地，用于脫水、透明和封片的試劑包括乙醇、二甲苯及顯微鏡封片用中性樹脂。

根據本發明的另一個方面，提供一種RFFL作為分子標志物在制備評估肝細胞癌預后的試劑盒中的應用。

進一步地，試劑盒包括用于肝癌組織標本石蠟包埋和切片的試劑，用于肝癌組織標本石蠟切片的脫蠟和水化的試劑，用于抗原修復的檸檬酸抗原修復液，用于滅活內源性過氧化物酶的雙氧水，用于封閉的封閉血清，山羊抗人RFFL蛋白多克隆抗體、辣根酶標記的兔抗山羊IgG抗體，用于顯色的DAB顯色劑和蘇木素，以及用于脫水、透明和封片的試劑。

根據本發明的再一個方面，提供一種RFFL作為分子標志物在體外評估肝細胞癌預后中的應用。

應用本發明的技術方案，通過應用本試劑盒對肝癌患者的組織標本中RFFL的表達情況進行檢測可以有效地對肝癌患者的生存預后情況進行準確評估。

附圖說明

構成本申請的一部分的說明書附圖用來提供對本發明的進一步理解，本發明的示意性實施例及其說明用于解釋本發明，并不構成對本發明的不當限定。在附圖中：