[發(fā)明專利]分析環(huán)境污染物對明亮發(fā)光桿菌長期微板毒性的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310449160.X
• 申請日: 2013-09-27
• 公開（公告）號: CN103487555A
• 公開（公告）日: 2014-01-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 莫凌云;覃禮堂;曾鴻鵠;李艷紅
• 申請（專利權(quán)）人: 桂林理工大學(xué)
• 主分類號: G01N33/00
• 分類號: G01N33/00;G01N1/28
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1.一種分析環(huán)境污染物對明亮發(fā)光桿菌長期微板毒性的方法，其特征在于具體步驟為：

(1)按照短期微板毒性分析法在固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)明亮發(fā)光桿菌菌落，菌落在22~23℃培養(yǎng)48小時后，保存于4℃冰箱中備用，所述固體培養(yǎng)基的配方按照短期微板毒性分析法進(jìn)行配制；

(2)從步驟(1)于4℃冰箱中保存?zhèn)溆玫拿髁涟l(fā)光桿菌菌落中挑取小米粒大小的菌落接種到長期培養(yǎng)基中培養(yǎng)，長期培養(yǎng)基置于振蕩培養(yǎng)箱,?振蕩轉(zhuǎn)速設(shè)為120轉(zhuǎn)每分鐘,?溫度保持22~23℃，直至明亮發(fā)光桿菌生長至對數(shù)期，即其相對發(fā)光單位大于等于?1.0×10⁵，所得菌液備用；

(3)按照稀釋因子設(shè)置12個濃度梯度，即

c_n=?c₀×Nⁿ，n=0,1,2,……,11;

其中c₀為儲備液濃度，c_n為設(shè)置的濃度，N為稀釋因子，所屬稀釋因子根據(jù)實際測定情況設(shè)定；

(4)取96孔微板備用，所述96孔微板上的微孔呈8行×12列的方式排列，將所述96?孔微板周邊的36?個微孔均加入?200?微升蒸餾水，在剩余微孔中選取第?2、3、7?及11?列共?24個微孔作為空白對照，剩余36個微孔為待測孔，按步驟(3)所設(shè)定的稀釋因子在36個待測孔中均勻設(shè)置12個濃度梯度,?各濃度做3?個平行,?每個待測孔中環(huán)境污染物溶液的體積為100微升；

(5)將步驟(3)培養(yǎng)的菌液與長期培養(yǎng)基按體積比1:4混合，制得混合菌液；

(6)利用多道移液槍向步驟(4)所述的36個待測孔中分別移取步驟(5)制得的混合菌液100微升，使待測孔中試液的總體積均達(dá)到200微升，96孔微板準(zhǔn)備完畢；

(7)將步驟(6)準(zhǔn)備好的96孔微板在21~23℃下培養(yǎng)12小時，并在21~23℃的環(huán)境下測定其相對發(fā)光單位；

所述長期培養(yǎng)基的組分濃度為短期培養(yǎng)基相應(yīng)組分濃度的2倍；

所述相對發(fā)光單位在酶標(biāo)儀上測定,?按下列公式計算環(huán)境污染物對明亮發(fā)光桿菌長期毒性的抑制率：

E=(I₀－I)/I₀×100%????；

I₀為空白控制樣品的發(fā)光強(qiáng)度平均值，I為各濃度3個平行樣的發(fā)光強(qiáng)度平均值，E為不同濃度時抑制發(fā)光百分?jǐn)?shù)。