[發明專利]使用含有海藻糖的細胞洗滌溶液的貼壁細胞的洗滌方法

有效

• 申請號: 201310447295.2
• 申請日: 2013-09-24
• 公開（公告）號: CN103710305A
• 公開（公告）日: 2014-04-09
• 發明（設計）人: 小林英司;和田圭樹;土居雅子
• 申請（專利權）人: 株式會社大塚制藥工場
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775
• 代理公司: 北京市金杜律師事務所 11256
• 代理人: 楊宏軍

1.一種貼壁細胞的洗滌方法，其特征在于，在通過蛋白質分解酶處理從培養容器剝離貼壁細胞之前，使用下述細胞洗滌液洗滌貼壁細胞，所述細胞洗滌液是向生理性水溶液中添加海藻糖或其衍生物或它們的鹽而成的。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，貼壁細胞是間充質干細胞。

3.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于，細胞洗滌液中的海藻糖或其衍生物或它們的鹽的濃度為1～15(w/v)％。

4.一種細胞洗滌液，用于在通過蛋白質分解酶處理從培養容器剝離貼壁細胞之前洗滌貼壁細胞，其特征在于，所述細胞洗滌液是向生理性水溶液中添加海藻糖或其衍生物或它們的鹽而成的。

5.如權利要求4所述的細胞洗滌液，其特征在于，貼壁細胞是間充質干細胞。

6.如權利要求4或5所述的細胞洗滌液，其特征在于，海藻糖或其衍生物或它們的鹽的濃度為1～15(w/v)％。

7.一種移植用細胞懸浮液的制造方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟(a)～(d)：

步驟(a)：除去貼壁細胞貼附的培養容器中的培養基，用向生理性水溶液中添加海藻糖或其衍生物或它們的鹽而成的細胞洗滌液洗滌貼壁細胞；

步驟(b)：通過蛋白質分解酶處理使得貼壁細胞從培養容器剝離；

步驟(c)：將從培養容器剝離的貼壁細胞懸浮于含有蛋白質的生理性水溶液中，制成細胞懸浮液；

步驟(d)：除去細胞懸浮液中的溶液，用生理性水溶液洗滌貼壁細胞。

8.如權利要求7所述的制造方法，其特征在于，貼壁細胞是間充質干細胞。

9.如權利要求7或8所述的制造方法，其特征在于，步驟(a)中的細胞洗滌液中的海藻糖或其衍生物或它們的鹽的濃度為1～15(w/v)％。

10.如權利要求7或8所述的制造方法，其特征在于，步驟(b)中的蛋白質分解酶為胰蛋白酶。

11.如權利要求7或8所述的制造方法，其特征在于，步驟(c)中的含有蛋白質的生理性水溶液還含有海藻糖或其衍生物或它們的鹽。

12.如權利要求7或8所述的制造方法，其特征在于，步驟(c)中的含有蛋白質的生理性水溶液為含有血清的動物細胞培養用基礎培養基。

13.如權利要求7或8所述的制造方法，其特征在于，步驟(d)中的生理性水溶液還含有海藻糖或其衍生物或它們的鹽。

14.一種試劑盒，用于制造移植用細胞懸浮液，其特征在于，所述試劑盒含有權利要求4～6中任一項所述的細胞洗滌液、及記載了關于所述細胞洗滌液對由蛋白質分解酶處理導致的細胞死亡的抑制效果的說明書。

15.海藻糖或其衍生物或它們的鹽在制造細胞洗滌液中的應用，所述細胞洗滌液用于在通過蛋白質分解酶處理從培養容器剝離貼壁細胞之前洗滌貼壁細胞。

16.海藻糖或其衍生物或它們的鹽，用于在通過蛋白質分解酶處理從培養容器剝離貼壁細胞之前洗滌貼壁細胞。