[發明專利]蛇足石杉內生真菌及其在制備吡咯類護肝藥中的應用

有效

• 申請號: 201310445222.X
• 申請日: 2013-09-27
• 公開（公告）號: CN103667073A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發明（設計）人: 單偉光;應優敏;占扎君
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12P17/10;C12R1/645
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種蛇足石杉內生真菌，是從蕨類植物蛇足石杉植株活體的莖部分離獲得，其分類命名為(Peyronellaea?glomerata)HS-ZJUT-XW12，該菌株已保藏在中國典型培養物保藏中心，保藏日期為2012年10月28日，保藏編號為CCTCC?M2012434，保藏單位地址為中國，武漢，武漢大學。?

2.根據權利要求1所述的蛇足石杉內生真菌，其特征在于，菌株的ITS堿基序列為：?

TTCCGTAGGTGAACCTGCGGAAGGATCATTACCTAGAGTTGTAGGCTTTGCCTGCTATCTCTTACCCATGTCTTTTGAGTACCTTACGTTTCCTCGGCGGGTCCGCCCGCCGATTGGACAATTTAAACCATTTGCAGTTGCAATCAGCGTCTGAAAAAACTTAATAGTTACAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAGTGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCCTTGGTATTCCATGGGGCATGCCTGTTCGAGCGTCATTTGTACCTTCAAGCTCTGCTTGGTGTTGGGTGTTTGTCTCGCCTCTGCGTGTAGACTCGCCTCAAAACAATTGGCAGCCGGCGTATTGATTTCGGAGCGCAGTACATCTCGCGCTTTGCACTCATAACGACGACGTCCAAAAGTACATTTTTACACTCTTGACCTCGGATCAGGTAGGGATACCCGCTGAACTTAAGCATATCAATAAGCGGAGG。?

3.根據權利要求1所述的蛇足石杉內生真菌，其特征在于，菌株的固體培養為：在馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)培養基上，于28℃下培養，菌絲呈白色絮狀，生長較緩慢、與培養基結合緊密；培養4～7天，菌落即鋪滿整皿，菌落呈土灰色、干燥、不透明、邊緣不平整，背面呈淺黃色。?

4.根據權利要求3所述的蛇足石杉內生真菌，其特征在于，所述的馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基，通過如下方法制得：取200g馬鈴薯去皮、切塊后，加1L?水煮沸約30分鐘，雙層紗布過濾，取濾液加20g葡萄糖、18g瓊脂溶解后，加水補足1L。?

5.一種用如權利要求1～4所述的蛇足石杉內生真菌制備吡咯類護肝化合物的方法，包括如下步驟：?

(1)挑取菌絲體接種于馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基，28℃培養，使菌株活化；?

(2)將活化好的菌株懸液接種于馬鈴薯葡萄糖液體培養基，121℃滅菌、28℃發酵培養，得菌液；?

(3)抽濾菌液，分別收集菌絲體和發酵液；發酵液用萃取劑萃取，減壓蒸餾、回收溶劑，得發酵液的提取物；?

(4)取發酵液的提取物，依次進行大孔樹脂吸附柱層析、硅膠柱層析、反相硅膠柱層析、凝膠柱層析，最終純化、洗脫，得終產物。?

6.根據權利要求5所述的用蛇足石杉內生真菌制備吡咯類護肝化合物的方法，其特征在于，步驟(2)中發酵培養的條件為：溫度28℃、180轉／分鐘的轉速下振蕩培養6天后靜置培養14天。?

7.根據權利要求6所述的用蛇足石杉內生真菌制備吡咯類護肝化合物的方法，其特征在于，步驟(3)中的萃取劑為乙酸乙酯。?

8.一種如權利要求1～4所述的蛇足石杉內生真菌在制備吡咯類護肝藥中的應用?