[發(fā)明專利]一種蛇足石杉內(nèi)生真菌及其在制備8α,15α-環(huán)氧化石杉堿甲的應用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201310445192.2 | 申請日： | 2013-09-27 |
| 公開（公告）號： | CN103667072A | 公開（公告）日： | 2014-03-26 |
| 發(fā)明（設計）人： | 單偉光;應優(yōu)敏;占扎君 | 申請（專利權(quán)）人： | 浙江工業(yè)大學 |
| 主分類號： | C12N1/14 | 分類號： | C12N1/14;C12P17/18;C12R1/645 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 310014 浙*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 蛇足 石杉內(nèi)生 真菌 及其 制備 15 氧化 石杉堿甲 應用 | ||
1.一種蛇足石杉內(nèi)生真菌，是從蕨類植物蛇足石杉植株活體中采用分離純化技術(shù)獲得，其分類命名為撕裂蠟孔菌(Ceriporia?lacerate)HS-ZJUT-C13A，該菌株已保藏在中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏日期為2012年10月28日，保藏編號為CCTCC?M2012433，保藏單位地址為中國，武漢，武漢大學。?
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蛇足石杉內(nèi)生真菌，其特征在于，菌株的ITS堿基序列為：?
CTGCGGAAGGATCATTATCGAGTTTTGAACGGGTTGTAGCTGGCCTTTAAC??
GAGGTATGTGCACGCCTGGCTCATCCACTCTCAACCTCTGTGCACTTTATGT??
AAGAAACGGTGTAAGCCAGCTATTTATTAGTTGGTAATAAGCCTTTCTTATG??
TTTACTACAAACGCTTCAGTTATAGAATGTTTACTGTGTATAACACAATTATA??
TACAACTTTCAGCAACGGATCTCTTGGCTCTCGCATCGATGAAGAACGCAG??
CGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCT??
TTGAACGCACCTTGCACTCCTTGGTATTCCGAGGAGTATGCCTGTTTGAGT??
CTCATGGAATTCTCAACCCCTAAATTTTGTAATGAAGTTTAGTGGGCTTGGA??
CTTGGAGGTTGTGTCGGCTTCTAGTCGACTCCTCTGAAATGCATTAGCGTG??
AATCTTACGGATCGCCTTCAGTGTGATAATTATCTGCGCTGTGGTGTTGAAG??
TATTTATTAGTTCGTGCTTATAATCGTCTCTTACCGAGACAATTTATGACAAT??
CTGAGCTCA。?
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蛇足石杉內(nèi)生真菌，其特征在于，菌株的固體培養(yǎng)為：在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上28℃培養(yǎng)，菌絲呈白色絨毛狀，生長蓬松、呈放射形生長，且多為氣生菌絲，與培養(yǎng)基結(jié)合緊密；培養(yǎng)4～7天，菌落即鋪滿整皿，菌落干燥、不透明、邊緣不平整，背面呈淺黃色。?
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的蛇足石杉內(nèi)生真菌，其特征在于，所述的馬鈴薯?葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，通過如下方法制得：取200g馬鈴薯去皮、切塊后，加1L水煮沸約30分鐘，雙層紗布過濾，取濾液加20g葡萄糖、18g瓊脂溶解后，加水補足1L。?
5.一種用如權(quán)利要求1～4所述的蛇足石杉內(nèi)生真菌在制備8α，15α-環(huán)氧化石杉堿甲的應用，其制備步驟如下：?
(1)挑取菌絲體接種于馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，28℃培養(yǎng)，使菌株活化；?
(2)將活化好的菌株接種于馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基，投入底物石杉堿甲，28℃發(fā)酵培養(yǎng)，得轉(zhuǎn)化產(chǎn)物；?
(3)發(fā)酵結(jié)束，除去菌絲，調(diào)節(jié)發(fā)酵液的PH至9～11，用萃取劑萃取，減壓蒸餾回收溶劑，得轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的提取物；?
(4)將轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的提取物用MCI大孔樹脂進行柱層析、洗脫，再經(jīng)凝膠柱層析、純化、洗脫，即得8α，15α-環(huán)氧化石杉堿甲。?
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的蛇足石杉內(nèi)生真菌在制備8α，15α-環(huán)氧化石杉堿甲的應用，其特征在于，步驟(2)中的發(fā)酵條件為：溫度28±2℃、轉(zhuǎn)速為160～200轉(zhuǎn)/分鐘，培養(yǎng)時間6～14天，底物石杉堿甲的終濃度為0.01～0.1mg/mL。?
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的蛇足石杉內(nèi)生真菌在制備8α，15α-環(huán)氧化石杉堿甲的應用，其特征在于，步驟(3)中的萃取劑為氯仿，發(fā)酵液的PH調(diào)節(jié)劑為濃氨水和無水碳酸鈉的混合。?
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