[發(fā)明專利]一種不同pH值下氨基酸的熒光檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310444231.7
• 申請(qǐng)日: 2013-09-26
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103472047A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-12-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 宋森;倪新龍;陶朱
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 貴州大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N21/64
• 分類號(hào): G01N21/64
• 代理公司: 貴陽(yáng)東圣專利商標(biāo)事務(wù)有限公司 52002
• 代理人: 徐逸心;袁慶云

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明一種不同pH值下氨基酸的熒光檢測(cè)方法屬分析化學(xué)及生命科學(xué)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

氨基酸是構(gòu)成生命體的基本物質(zhì)，是細(xì)胞代謝的基礎(chǔ)物質(zhì)。氨基酸的快速識(shí)別對(duì)細(xì)胞代謝分析具有重要意義，因此氨基酸的選擇性識(shí)別與檢測(cè)引起了人們極大的興趣。目前，對(duì)氨基酸進(jìn)行識(shí)別的常用方法是高效液相色譜(HPLC)、氣相色譜(GC)和毛細(xì)管、電泳(CE)等各種色譜法。這些方法具有精確度高和檢出限低的優(yōu)點(diǎn)，但樣品前處理時(shí)間長(zhǎng)、成本高，很難適應(yīng)快速檢測(cè)，限制了它們的應(yīng)用。近年來(lái)，由于熒光分析的高靈敏和高選擇性，實(shí)時(shí)原位檢測(cè)，設(shè)備簡(jiǎn)單，多種用于氨基酸鑒別的熒光分子傳感器相繼被報(bào)道，然而多數(shù)熒光分子傳感器只能選擇性的識(shí)別一些含巰基等特殊功能基團(tuán)的氨基酸分子，而對(duì)其它氨基酸分子的高選擇性識(shí)別檢測(cè)則相對(duì)較少。尤其是不同pH值條件下關(guān)于氨基酸分子的檢測(cè)尚未見(jiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于發(fā)明一種不同pH值下氨基酸的熒光檢測(cè)方法。本發(fā)明的目的通過(guò)下列技術(shù)措施完成:

本發(fā)明一種不同pH值下氨基酸的熒光檢測(cè)方法是在水溶液中，以七元瓜環(huán)簡(jiǎn)稱Q[7]與吖啶鹽酸鹽形成的1:1超分子自組裝結(jié)構(gòu)的熒光探針P，在水溶液中熒光探針P與色氨酸或賴氨酸分子反應(yīng)后利用色氨酸或賴氨酸分子與七元瓜環(huán)Q[7]更容易形成超分子自組裝結(jié)構(gòu)，從而釋放吖啶分子作為熒光信號(hào)分子對(duì)色氨酸或賴氨酸分子進(jìn)行定性定量檢測(cè)，Q[7]與吖啶鹽酸鹽1:1形成的超分子自組裝結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)稱熒光探針P的化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下:

熒光探針P與色氨酸或賴氨酸分子作用后的激發(fā)波長(zhǎng)245?nm,?在pH＜4.0情況下的最大發(fā)射波長(zhǎng)470?nm,?在4.0＜pH＜5.5情況下的最大發(fā)射波長(zhǎng)450?nm,?在6.0＜pH≤7.2情況下的最大發(fā)射波長(zhǎng)430?nm。檢測(cè)色氨酸或賴氨酸或色氨酸和賴氨酸分子混合物的最低濃度至10^-7?mol·L^-1，其它共存氨基酸分子都不干擾色氨酸或賴氨酸或色氨酸和賴氨酸分子混合物的測(cè)定。

上述定性檢測(cè)色氨酸或賴氨酸或色氨酸和賴氨酸分子混合物的方法是在一定濃度范圍內(nèi)的純熒光探針?biāo)芤褐校?dāng)激發(fā)波長(zhǎng)為245nm時(shí)，熒光探針的最大發(fā)射波長(zhǎng)是480nm,?當(dāng)熒光探針?biāo)芤褐写嬖谏彼峄蛸嚢彼峄蛏彼岷唾嚢彼岱肿踊旌衔飼r(shí)，在pH＜4.0情況下,熒光探針的最大發(fā)射波長(zhǎng)從480nm?藍(lán)移至470?nm表現(xiàn)為淺綠色熒光，在4.0＜pH＜5.5情況下,?熒光探針的最大發(fā)射波長(zhǎng)從480nm?藍(lán)移至450nm表現(xiàn)為藍(lán)綠色熒光,?在6.0＜pH≤7.2情況下的最大發(fā)射波長(zhǎng)從480nm?藍(lán)移至430nm表現(xiàn)為藍(lán)色熒光，色氨酸或賴氨酸分子的檢測(cè)限最低至10^-7?mol·L^-1。

上述定量分析方法為(1)?熒光探針P溶液的配制方法，分別稱取14毫克七元瓜環(huán)及吖啶鹽酸鹽2.5毫克用水溶解，配制成10.0?mL，濃度為1.0?×?10^-3?mol·L^-1，根據(jù)需要用蒸餾水逐級(jí)稀釋到1.00?×?10^-4?mol·L^-1的濃度;?(2)?色氨酸或賴氨酸及其它共存氨基酸分子的標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取優(yōu)級(jí)純氨基酸配制成100?mL溶液，氨基酸濃度為1.00×10^-3?mol·L^-1，根據(jù)需要用蒸餾水逐級(jí)稀釋到適宜的濃度;?(3)?取5個(gè)10.0?mL?容量瓶中分別加入熒光探針1.00?×?10^-4?mol·L^-1標(biāo)準(zhǔn)液1.0?mL，分別加入1.00?×?10^-4?mol·L^-1,?0,?0.2,?0.5,?1,?2?毫升的色氨酸或賴氨酸或色氨酸和賴氨酸分子混合物溶液，調(diào)節(jié)pH并稀釋至刻度搖勻，室溫放置5分鐘;?(4)?引入熒光光譜進(jìn)行測(cè)定，激發(fā)波長(zhǎng)245nm;?(5)?以色氨酸或賴氨酸或色氨酸和賴氨酸分子混合物濃度為橫坐標(biāo)，熒光強(qiáng)度為縱坐標(biāo)，得到工作曲線;?(6)?樣品測(cè)定，取10.0?mL?容量瓶，加入探針濃度為1.00?×?10^-4?mol·L^-1?1.0?mL，加入被測(cè)色氨酸或賴氨酸或色氨酸和賴氨酸分子混合物溶液，稀釋至刻度，室溫放置5分鐘，引入3.0?cm的石英比色皿進(jìn)行熒光測(cè)定，根據(jù)熒光強(qiáng)度在工作曲線上查出樣品濃度。