[發明專利]一種針對H2A.Z變體的納米抗體、其編碼序列及應用

無效

• 申請號: 201310443530.9
• 申請日: 2013-09-26
• 公開（公告）號: CN103497253A
• 公開（公告）日: 2014-01-08
• 發明（設計）人: 萬亞坤;母亞雯;孫燕燕
• 申請（專利權）人: 東南大學
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C12N15/13;G01N33/574;C12N1/21
• 代理公司: 南京瑞弘專利商標事務所(普通合伙) 32249
• 代理人: 馮慧

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技術領域

本發明為針對一種組蛋白變體H2A.Z的抗原表位的納米抗體(或稱單域抗體片段，single?domain?antibody?fragment)，同時還公布了編碼該納米抗體的氨基酸序列，制備所述納米抗體的方法，表達或能夠表達該納米抗體的宿主細胞。該納米抗體能夠在大腸桿菌內高效表達，可應用于癌癥相關蛋白高表達機制以及相關轉錄調控機制的研究。

背景技術

真核生物的基因組在細胞中被高度地壓縮形成染色質。染色質結構的基本單位是核小體，核小體是由4?種核心組蛋白?H2A，H2B，H3?和?H4形成的組蛋白八聚體構成，每一種組蛋白都由兩個分子形成，約147bp左右的DNA纏繞在組蛋白八聚體上形成一個核小體單位，組蛋白H1結合在兩個相鄰核心組蛋白間，可以鎖住核小體DNA的進出端，起穩定核小體的作用。而組蛋白變體是相對于染色體中常規組蛋白而言的，是特殊狀態的染色體所需的組蛋白類型。處于不同狀態的染色質需要相應的組蛋白變體維持其結構，以完成其生物學功能。在核心組蛋白中，組蛋白H2A最不保守，變體最多，其中對H2A.Z?變體的研究非常廣泛，它和常規組蛋白H2A?在?N-?和?C-?末端具有不同的氨基酸組成。H2A.Z?對基因表達調控的影響最先在四膜蟲細胞中被證實。隨后的一些研究表明，H2A.Z普遍存在于真核生物細胞中，從酵母到哺乳類動物具有極強的進化保守性，它替代H2A整合到染色體上，與H2B形成的二聚體使DNA對核小體的纏繞相對比較松，保護常染色質，防止異染色質的形成，對基因的表達起著重要的調控作用。有文章報道指出：常染色質上活動和不活動的基因5’端均富含組蛋白變體H2A.Z。H2A.Z也與DNA甲基化有密切的聯系。H2A.Z在胚胎干細胞的分化過程中也起著重要的作用。

納米抗體技術，是在傳統抗體制備的基礎上，運用分子生物學技術融合納米粒子概念進行的抗體工程革命，從而研發出的最新、最小的抗體分子。普通的抗體蛋白由兩條重鏈和兩條輕鏈組成，而1993年?,?Hamers-Casterman等報道從駱駝血液中發現的新型抗體天然缺失輕鏈,只有兩條重鏈,即重鏈抗體?(HCAbs)。它具有獨特的重鏈可變區?(VHH)?,一個鉸鏈區和兩個恒定區?(CH2和?CH3)。恒定區CH1是與輕鏈錨定的部位?,?存在于納米抗體的基因組中,?但在mRNA形成中被剪切掉?,?所以納米抗體缺乏輕鏈。因此，納米抗體僅靠3個?CDRs就具備了特異的抗原結合能力和高親合力?,?而普通抗體則需要?6個CDRs。這些“重鏈抗體”能像正常抗體一樣與抗原等靶標緊緊結合，但不像單鏈抗體那樣相互黏連聚集成塊?？寺≈劓溈贵w的可變區得到只由一個重鏈可變區組成的單域抗體稱為?VHH抗體?(?variable?domain?of?heavy?chain?of?heavy?chain?antibody)?。其晶體結構直徑?215?nm、長?4?nm，分子量只有普通抗體的1/10，化學性質很靈活，穩定性好，可溶性高，表達容易、容易獲得且容易偶聯其他分子，并具有獨特的識別構造表位，可作為腫瘤診斷的工具。因此制備與癌癥和轉錄調控密切相關的H2A.Z的納米抗體具有廣闊的前景。

發明內容

???解決的技術問題：本發明的目的是提供一種針對H2A.Z變體的納米抗體、其編碼序列及應用，針對組蛋白H2A.Z表位的納米抗體，同時提供該納米抗體的編碼序列及在制備用于腫瘤治療藥物中的應用。

技術方案：一種針對組蛋白H2A.Z變體的納米抗體VHH鏈，包括框架區和互補決定區；其中所述的框架區為4個，分別為FR1-FR4，其中，FR1：為SEQ?NO.4-?SEQ?NO.6所述的氨基酸序列;?FR2：為SEQ?NO.7-?SEQ?NO.9所示的氨基酸序列;?FR3：為SEQ?NO.10-?SEQ?NO.12所示的氨基酸序列;?FR4：為SEQ?NO.13-?SEQ?NO.15所示的氨基酸序列;所述的互補決定區為CDR1-CDR3的氨基酸序列，其中，CDR1:為SEQ?NO.16-?SEQ?NO.18所示的氨基酸序列；CDR2:?為SEQ?NO.19-?SEQ?NO.21所示的氨基酸序列;CDR3:?為SEQ?NO.22-?SEQ?NO.24所示的氨基酸序列。

一種針對組蛋白?H2A.Z變體的納米抗體，包括權利要求1所述的納米抗體VHH鏈。

所述的納米抗體為H2A.Z#11，H2A.Z#74，H2A.Z#95，其中H2A.Z#11的氨基酸序列為SEQNO.1所示；H2A.Z#74的氨基酸序列為SEQNO.2所示，H2A.Z#95的氨基酸序列為SEQNO.3所示。