[發明專利]一種腦蛋白水解物制備方法

在審

• 申請號: 201310442849.X
• 申請日: 2013-09-26
• 公開（公告）號: CN104511008A
• 公開（公告）日: 2015-04-15
• 發明（設計）人: 曹捷;高帆;周戰;尚磊
• 申請（專利權）人: 西藏易明西雅醫藥科技股份有限公司
• 主分類號: A61K38/01
• 分類號: A61K38/01;A61K35/30;A61P3/02;A61P25/00;A61P39/00
• 代理公司: 無
• 代理人: 無

技術領域

本發明屬于醫藥技術領域，具體涉及一種腦蛋白水解物的制備方法。

背景技術

腦蛋白水解物類藥物是近年應用最多生化藥物之一。在國內外相關研究領域及市場上占有重要地位。腦蛋白水解物作為健康、新鮮動物大腦組織經多酶酶解提取的一種活性腦多肽類物質，含有多種人腦必須氨基酸及腦磷脂、卵磷脂、肽類神經生長因子等重要元素，能以多種方式作用于中樞神經，調節和改善神經元的代謝，促進突觸的形成，誘導神經元的分化，并進一步保護神經細胞免受各種缺血和神經毒素的損害。它可以通過血腦屏障，促進腦內蛋白質的合成，影響呼吸鏈，具有抗缺氧的保護能力，改善腦內能量代謝，激活腺苷酸環化酶催化其他激素系統，提供神經遞質、肽類激素及輔酶前體。目前，臨床上主要采用腦蛋白水解物制成注射劑，用于治療癡呆和腦功能障礙、腦發育不全、腦萎縮、神經衰弱、腦外傷綜合癥、中樞神經系統感染、腦膜炎、老年性癡呆、抑郁癥、精神病或腦血管代謝失調等多種疾病，同時能有效增強學習記憶能力

CN200410022091.5公開了一種腦蛋白水解物的制備方法，該發明通過先后使用胃蛋白酶、胰蛋白酶進行酶解的方法制備腦蛋白水解物，該方法工序復雜，且要調節酸堿性，可能出現蛋白質變性等問題。

發明內容

基于上述原因，申請人在研究過程中，得到一種的方法：該方法采用木瓜蛋白酶水解、復合酶水解、調節pH值和納濾相結合的步驟，特別是使用一定比例的復合酶，得到腦蛋白水解物，該腦蛋白水解物，具有肽和總氮含量高，活力數值高，藥理活性更強的優點。

具體而言，本發明提供了：

一種腦蛋白水解物的制備方法，該方法包括以下步驟：

a)原料處理：將新鮮或冷凍保存的豬腦去除表面的包膜及血管，切成小塊后用0.5～5％氫氧化鈉溶液浸泡12～48小時，取出洗凈，瀝干水分，備用；

b)酶水解：在盛放豬腦的反應釜中加水，按5000-10000U/g底物的比例加入自植物提取的木瓜蛋白酶，攪拌，酶解4-6小時；

c)復合酶水解：將步驟b)所得產物中加入復合酶，攪拌，酶解5-10小時；

d)滅菌：將步驟c)所得產物調節pH為6-7后，升溫至80-85℃，滅酶8-12min，冷卻至室溫后加入活性炭，攪拌2-5小時后過濾，得濾液；

e)濃縮：將步驟d)所得濾液用100～1000Da的納濾膜進行超濾，收集截留液；

f)將收集的截留液進行噴霧干燥，得到所述腦蛋白水解物。

所述復合酶為來自解淀粉芽孢桿菌的細菌蛋白酶、來自地衣芽孢桿菌的細菌蛋白酶組成的混合物。

所述來自解淀粉芽孢桿菌的細菌蛋白酶的酶活力為40萬U/克。

所述來自地衣芽孢桿菌的細菌蛋白酶的酶活力為10萬U/克。

所述復合酶中自解淀粉芽孢桿菌的細菌蛋白酶、來自地衣芽孢桿菌的細菌蛋白酶重量比為(0.5～3)：(1～5)。

所述復合酶中自解淀粉芽孢桿菌的細菌蛋白酶、來自地衣芽孢桿菌的細菌蛋白酶重量比優選1：2。

上述所述的制備方法得到的腦蛋白水解物為原料制備成口服制劑或注射制劑。

本發明所述的來自解淀粉芽孢桿菌的細菌蛋白酶、來自地衣芽孢桿菌的細菌蛋白酶、木瓜蛋白酶均購自上海寶豐生化有限公司。

本發明與現有技術相比具有以下優點和積極效果：

1、采用木瓜蛋白酶和復合酶的兩步酶解的工藝保證最大程度上實現原料的水解；

2、用活性炭脫臭，充分利用活性炭的吸附作用和助濾作用，提高了產品含量，同時縮短了工藝時間；

3、采用納濾膜進行膜分離，有效去除了小分子雜質，同時還對料液進行了濃縮，大幅降低了噴霧干燥過程的能耗；

4、本發明所述制備方法簡單，易于工業化生產；

5、由該方法制備腦蛋白粉末肽含量高，活力高。

具體實施方式

以下通過具體實施方式的描述對本發明作進一步說明，但這并非是對本發明的限制，本領域技術人員根據本發明的基本思想，可以做出各種修改或改進，但是只要不脫離本發明的基本思想，均在本發明的范圍之內。

本發明下述試驗是在多次創造性試驗基礎上，進行的結論性驗證試驗。

實驗例1動物藥效學試驗

試驗藥物：市售復方腦蛋白水解物片(購自大連貝爾藥業有限公司)、本發明實施例5制得的樣品，以蒸餾水配成所需濃度的溶液，供口服給藥

使用。

1)對小鼠低壓缺氧狀態的影響