[發(fā)明專(zhuān)利]一種基因載體系統(tǒng)及其制備方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201310442744.4 | 申請(qǐng)日: | 2013-09-25 |
| 公開(kāi)(公告)號(hào): | CN103497961A | 公開(kāi)(公告)日: | 2014-01-08 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人: | 田華雨;焦自學(xué);陳學(xué)思;林琳;郭兆培;陳杰 | 申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人: | 中國(guó)科學(xué)院長(zhǎng)春應(yīng)用化學(xué)研究所 |
| 主分類(lèi)號(hào): | C12N15/63 | 分類(lèi)號(hào): | C12N15/63;C12N15/87;C08G69/48 |
| 代理公司: | 北京集佳知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227 | 代理人: | 趙青朵;李玉秋 |
| 地址: | 130022 吉*** | 國(guó)省代碼: | 吉林;22 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關(guān)鍵詞: | 一種 基因 載體 系統(tǒng) 及其 制備 方法 | ||
1.一種基因載體系統(tǒng),包括:pH敏感遮蔽體系、陽(yáng)離子載體和基因物質(zhì);
所述pH敏感遮蔽體系為聚谷氨酸酯與2-叔丁氧羰基氨基乙硫醇和巰基乙酸反應(yīng)并脫叔丁氧羰基保護(hù)得到的聚合物,所述聚谷氨酸酯由聚乙烯亞胺或小分子烷胺引發(fā)γ-丙炔基-L-谷氨酸-N-內(nèi)羧酸酐開(kāi)環(huán)聚合得到;
所述pH敏感遮蔽體系與陽(yáng)離子載體的質(zhì)量比為(2~100):1;
所述pH敏感遮蔽體系與基因物質(zhì)的質(zhì)量比為(5~80):1;
所述基因物質(zhì)為質(zhì)粒DNA或siRNA。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基因載體系統(tǒng),其特征在于,所述聚谷氨酸酯中,γ-丙炔基-L-谷氨酸-N-內(nèi)羧酸酐與聚乙烯亞胺的質(zhì)量比為(1.5~50):1,γ-丙炔基-L-谷氨酸-N-內(nèi)羧酸酐與小分子烷胺的質(zhì)量比為(2~200):1。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基因載體系統(tǒng),其特征在于,所述pH敏感遮蔽體系中,聚谷氨酸酯中所含氮的摩爾數(shù)與2-叔丁氧羰基氨基乙硫醇中所含巰基和巰基乙酸所含巰基的摩爾數(shù)之和的比例為1:(2~20);所述2-叔丁氧羰基氨基乙硫醇與巰基乙酸的摩爾比為1:(0.1~10)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基因載體系統(tǒng),其特征在于,所述陽(yáng)離子載體與基因物質(zhì)的質(zhì)量比為(0.5~50):1。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基因載體系統(tǒng),其特征在于,所述陽(yáng)離子載體為聚乙烯亞胺,其數(shù)均分子量為500~40000。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基因載體系統(tǒng),其特征在于,所述pH敏感遮蔽體系中,聚乙烯亞胺具有式I線(xiàn)性結(jié)構(gòu)或式II支化結(jié)構(gòu),
其中,a為聚合度,a≥1;b為聚合度,b≥1;c為聚合度,c≥1。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基因載體系統(tǒng),其特征在于,所述pH敏感遮蔽體系中,聚乙烯亞胺的數(shù)均分子量為500~25000,小分子烷胺的分子量為50~500。
8.一種基因載體系統(tǒng)的制備方法,包括以下步驟:
A)將基因物質(zhì)與陽(yáng)離子載體混合孵育,得到二元復(fù)合物;
所述基因物質(zhì)為質(zhì)粒DNA或siRNA;
B)將所述二元復(fù)合物與pH敏感遮蔽體系混合,得到基因載體系統(tǒng);
所述pH敏感遮蔽體系為聚谷氨酸酯與2-叔丁氧羰基氨基乙硫醇和巰基乙酸反應(yīng)并脫叔丁氧羰基保護(hù)得到的聚合物,所述聚谷氨酸酯由聚乙烯亞胺或小分子烷胺引發(fā)γ-丙炔基-L-谷氨酸-N-內(nèi)羧酸酐開(kāi)環(huán)聚合得到;
所述pH敏感遮蔽體系與陽(yáng)離子載體的質(zhì)量比為(2~100):1;
所述pH敏感遮蔽體系與基因物質(zhì)的質(zhì)量比為(5~80):1;
所述基因物質(zhì)為質(zhì)粒DNA或siRNA。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的制備方法,其特征在于,所述聚谷氨酸酯中,γ-丙炔基-L-谷氨酸-N-內(nèi)羧酸酐與聚乙烯亞胺的質(zhì)量比為(1.5~50):1,γ-丙炔基-L-谷氨酸-N-內(nèi)羧酸酐與小分子烷胺的質(zhì)量比為(2~200):1。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的制備方法,其特征在于,所述混合孵育的時(shí)間為10~30分鐘。
11.一種氨基酸聚合物,為聚谷氨酸酯與2-叔丁氧羰基氨基乙硫醇和巰基乙酸反應(yīng)并脫叔丁氧羰基保護(hù)得到的聚合物;所述聚谷氨酸酯由聚乙烯亞胺或小分子烷胺引發(fā)γ-丙炔基-L-谷氨酸-N-內(nèi)羧酸酐開(kāi)環(huán)聚合得到。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的氨基酸聚合物,其特征在于,所述聚谷氨酸酯中所含氮的摩爾數(shù)與2-叔丁氧羰基氨基乙硫醇中所含巰基和巰基乙酸所含巰基的摩爾數(shù)之和的比例為1:(2~20);所述2-叔丁氧羰基氨基乙硫醇與巰基乙酸的摩爾比為1:(0.1~10);所述γ-丙炔基-L-谷氨酸-N-內(nèi)羧酸酐與聚乙烯亞胺的質(zhì)量比為(1.5~50):1;所述γ-丙炔基-L-谷氨酸-N-內(nèi)羧酸酐與小分子烷胺的質(zhì)量比為(2~200):1。
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