[發明專利]水稻OsXrn4基因及其應用

有效

• 申請號: 201310442714.3
• 申請日: 2013-09-25
• 公開（公告）號: CN103497958A
• 公開（公告）日: 2014-01-08
• 發明（設計）人: 燕飛;姜珊珊;姜良良;楊健;魯宇文;鄭紅英;林林;程曄;陳劍平
• 申請（專利權）人: 浙江省農業科學院
• 主分類號: C12N15/55
• 分類號: C12N15/55;C12N15/82;A01H5/00;C12N1/21;C12N15/74
• 代理公司: 杭州豐禾專利事務所有限公司 33214
• 代理人: 王從友

1.水稻OsXrn4基因，其特征在于：該基因的核苷酸序列為SEQ?ID?NO：1所示。

2.包含權利要求1所述的基因的植物表達載體。

3.宿主細胞，其特征在于：該宿主細胞由權利要求2所述的植物表達載體轉化。

4.根據權利要求3所述的宿主細胞，其特征在于：轉化菌株為農桿菌菌株EHA105。

5.植物受體細胞或組織，其特征在于：該植物受體細胞或組織采用權利要求3或4所述的宿主細胞轉化獲得。

6.根據權利要求1所述的水稻OsXrn4基因的用途，其特征在于：該基因用于制備轉基因抗病毒植物體。

7.根據權利要求6所述的水稻OsXrn4基因的用途，其特征在于：該基因用于制備抗水稻條紋葉枯病毒（Rice?stripe?virus）的水稻或抗煙草花葉病毒（Tobacco?Mosaic?Virus）的煙草。

8.一種采用權利要求1所述的水稻OsXrn4基因制備重組農桿菌的方法，其特征在于該方法包括以下的步驟：

1）水稻OsXrn4基因的克隆

通過與已報道的擬南芥的AtXrn4序列進行Blast分析，獲得水稻OsXrn4基因序列，同源性達95%以上，以此序列設計引物，獲取基因全長，水稻OsXrn4基因的核苷酸序列為SEQ?ID?NO：1所示；引物序列如下：

RXRN4?f:??5’-CCGAGACTCCGAGAGAGATTAG-3’，

RXRN4?r:??5’-GCTTACACATTTACAATGGCCG-3’；

2）載體構建

分析全序列水稻OsXrn4基因酶切位點及雙元表達載體pCV-GFP-2N的多克隆位點，設計引物，構建載體；引物序列如下：

RX1f:?5’-TCTAGAATGGGAGTCCCGGCGTTCTACC-3’，

RX1r:?5’-TCTAGACCTCTGCTGATTCAT-3’，

RX3f:?5’-GGATCCTAGGATGGCCATGGATA-3’，

RX3r:?5’-GAGCTCTCACTCACTCAGGCCATTGG-3’；

3）轉化農桿菌

取-70?℃保存的EHA105農桿菌感受態，置冰上融解；取1μl抽純OsXrn4-Pcv-2N質粒加入到100?μl感受態中，混勻，加入到處理好的電擊杯；設置2.2V電壓，電擊轉化；點擊完成加入900?μl的YEP液體培養基；28?℃，200?rpm搖床培養2?h，菌液涂布在含50?μg/ml卡那霉素和100?μg/ml利福平平板上，28?℃培養至形成單菌落。

9.一種抗水稻條紋葉枯病毒（Rice?stripe?virus）的水稻的制備方法，其特征在于該方法采用利要求3所述的宿主細胞對水稻成熟胚進行的遺傳轉化獲得。

10.一種抗煙草花葉病毒（Tobacco?Mosaic?Virus）的煙草的制備方法，其特征在于該方法采用利要求3所述的宿主細胞對煙草葉盤法進行遺傳轉化獲得。