[發明專利]一株丁香假單胞菌及其在番茄灰霉病防治中的應用

有效

• 申請號: 201310441326.3
• 申請日: 2013-09-25
• 公開（公告）號: CN103525725A
• 公開（公告）日: 2014-01-22
• 發明（設計）人: 曲娟娟;金羽;于敏;張春苗;黎扣扣
• 申請（專利權）人: 東北農業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01N63/02;A01P3/00;C12R1/38
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨;韓小雷

技術領域

本發明涉及一株丁香假單胞菌，尤其涉及該菌株在番茄灰霉病防治中的應用，屬于生物技術領域。?

背景技術

番茄灰霉病是一種常見且危害較重的真菌病害，除危害番茄外，還可危害茄子、辣椒、黃瓜等20多種作物。低溫、連續陰雨天氣多的年份危害嚴重，發病嚴重時造成莖葉枯死和大量的爛花、爛果，直接影響產量。目前常用的防治措施就是摘取老葉，加大通風，降低空氣濕度。藥物方面主要是利用萬霉靈粉劑、百菌清煙劑熏棚或是用甲霜靈可濕性粉，但是無論用哪種方法其治愈效果都不理想。為了尋求安全有效的防治措施，人們越來越關注生物防治。生物防治是利用一種或多種生物（除人類外）或其代謝產物來降低植物病原物的數量或抑制其致病能力而減輕植物病害的一類措施。與傳統的防治技術相比，生物防治技術具有不污染環境、對人和其他生物安全、防治作用持久、產品無殘留、對病蟲的殺傷特異性強，易于同其他植物保護措施協調配合并能節約能源等優點，必將在有害生物綜合防治中發揮著越來越重要的作用。到目前為止，真菌、酵母菌、細菌、放線菌都可用于生物防治。例如：利用稻黑孢菌46和鏈格孢菌的代謝產物進行生物防治。利用細菌制約有害微生物是開發、利用微生物資源的重要研究領域之一，也是植物病害防治中最具有潛力、應用前景最為廣闊的有效途徑之一。其主要優勢在于：繁殖速度快、對病原菌的作用方式較廣、培養成本低廉，而且在培養時還會產生很多的抗菌物質，如細菌素、抗生素、胞外裂解酶、脂肽類等多種形式，有些細菌不僅能防治病害而且可以增加作物產量。?

近年來，國內外的許多學者都在利用有益的微生物或其代謝產物來抑制病原微生物，使生物防治發展迅速，其中假單胞菌在植物病害防治中起到了非常重要的作用。非致病假單胞菌活躍于植物根際，屬于植物根際促生菌一類，植物根際假單胞菌已被應用在谷物種子或土壤中以抑制谷物病原菌的生長。非致病假單胞菌生物防?治作用主要通過根際營養競爭、分泌降解微生物的酶及抗生作用等實現。分離自小麥全蝕病自然衰退土壤的熒光假單胞菌(Pseudomonas?fluorescens)2P24能產生多種抗菌物質，可以有效防治多種植物病原真菌、細菌引起的土傳病害。隨著人們對環境保護意識的增強，對綠色食品需求的增加，利用微生物代謝產物替代化學藥物防治農作物病蟲害將是今后農業發展的重點，它必將有力地推進生防事業的發展，造福人類。?

發明內容

本發明針對番茄灰霉的生物防治問題，提供了一種丁香假單胞菌（Pseudomonas?syringae）ZY-1，及利用該菌株發酵培養液防治植物灰霉病害的方法。?

本發明丁香假單胞菌的分離、篩選與鑒定：?

1、從黑龍江伊春五營森林公園土壤樣品中分離、純化后獲得一株具有抗真菌活性的細菌；經微生物分類學鑒定為丁香假單胞菌（Pseudomonas?sp.），命名為丁香假單胞菌（Pseudomonas?sp.）ZY-1。所述菌株微生物保藏號為：CGMCC?No.7906，保藏日期2013年07月10號，其分類命名為：假單胞菌科假單胞菌屬丁香假單胞菌Pseudomonas?sp.，保藏單位為中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地址為北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所。?

2、本發明所述丁香假單胞菌（Pseudomonas?syringae）的分離和純化?

（1）菌株的分離：將10g土壤樣品加入到90ml無菌水中，用10倍稀釋法分別配置10^-5、10^-6、10^-7g/ml的土壤懸液，分別涂布到分離培養基（分離培養基即為LB固體培養基）上，32℃培養2天，觀察出現抑菌圈的菌落，測定溶真菌圈直徑(D)、菌落直徑(d)，根據能否產生溶菌圈與D/d值大小來初步確定菌株的抑菌能力，將D/d≥1.5的菌株在LB培養基上劃線純化、32℃培養1天；?

（2）菌株的純化：接種環挑取上述分離菌株培養物，劃線接種到LB固體培養基平板上，32℃培養，待出現單菌落后，重復上述操作2-3次，直到出現單菌落。將單菌落培養物接種至無菌LB試管斜面培養基，32℃培養1天后，于4℃下保存備用。?

3、本發明所述丁香假單胞菌（Pseudomonas?syringae）的分離和純化后經鑒定，?具有如下生物學特征：?