[發(fā)明專利]一種CD3抗原及其制備方法和用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310440453.1
• 申請日: 2013-09-23
• 公開（公告）號: CN103509122A
• 公開（公告）日: 2014-01-15
• 發(fā)明（設計）人: 張敬;王瑞;鐘慧;李剛;周鵬飛
• 申請（專利權）人: 武漢友芝友生物制藥有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/85;G01N33/68;G01N33/53
• 代理公司: 北京市百倫律師事務所 11433
• 代理人: 周紅力;姜瑩

1.一種CD3抗原，其特征在于所述抗原包括：2個相同的連接肽，異亮氨酸拉鏈結(jié)構，CD3的ε亞基CD3E的胞外結(jié)構域CD3E?ECD，以及CD3的δ亞基CD3D的胞外結(jié)構域CD3D?ECD或者CD3的γ亞基CD3G的胞外結(jié)構域CD3G?ECD；

其中，所述2個相同的連接肽之間能夠形成二硫鍵，所述異亮氨酸拉鏈結(jié)構由多肽鏈LZ1和多肽鏈LZ2形成；

其中，所述抗原為由兩個融合蛋白通過異亮氨酸氨酸拉鏈結(jié)構所形成的異二聚體，在第一個融合蛋白中，CD3E?ECD的C端通過一個連接肽連接在多肽鏈LZ1的N端，構成融合蛋白CD3E?ECD-LZ1，在第二個融合蛋白中，CD3D?ECD的C端通過另一個連接肽連接在多肽鏈LZ2的N端，構成融合蛋白CD3D?ECD-LZ2或者CD3G?ECD的C端通過另一個連接肽連接在多肽鏈LZ2的N端，構成融合蛋白CD3G?ECD-LZ2。

2.根據(jù)權利要求1所述的CD3抗原，其中，所述多肽鏈LZ1和多肽鏈LZ2的長度相同為40-70個氨基酸。

3.根據(jù)權利要求1或2所述的CD3抗原，其中，所述異亮氨酸拉鏈結(jié)構選自按照以下組合方式形成的異亮氨酸拉鏈結(jié)構中的一種：

組合A：SEQ?ID?NO：4所示的氨基酸序列所編碼的多肽鏈與SEQ?ID?NO：5所示的氨基酸序列所編碼的多肽鏈所組成的異亮氨酸拉鏈結(jié)構；

組合B：SEQ?ID?NO：6所示的氨基酸序列所編碼的多肽鏈與SEQ?ID?NO：7所示的氨基酸序列所編碼的多肽鏈所組成的異亮氨酸拉鏈結(jié)構；

組合C：SEQ?ID?NO：8所示的氨基酸序列所編碼的多肽鏈與SEQ?ID?NO：9所示的氨基酸序列所編碼的多肽鏈所組成的異亮氨酸拉鏈結(jié)構；

組合D：SEQ?ID?NO：10所示的氨基酸序列所編碼的多肽鏈與SEQ?ID?NO：11所示的氨基酸序列所編碼的多肽鏈所組成的異亮氨酸拉鏈結(jié)構；

組合E：SEQ?ID?NO：12所示的氨基酸序列所編碼的多肽鏈與SEQ?ID?NO：13所示的氨基酸序列所編碼的多肽鏈所組成的異亮氨酸拉鏈結(jié)構；

組合F：SEQ?ID?NO：14所示的氨基酸序列所編碼的多肽鏈與SEQ?ID?NO：15所示的氨基酸序列所編碼的多肽鏈所組成的異亮氨酸拉鏈結(jié)構。

4.根據(jù)權利要求1或2所述的CD3抗原，其中，所述連接肽的氨基酸序列選自SEQ?ID?NO：16-SEQ?ID?NO：19所示的氨基酸序列中的一種。

5.根據(jù)權利要求1或2所述的CD3抗原，其中，在所述融合蛋白中，多肽鏈LZ1和多肽鏈LZ2的C端分別連接有一個相同或不同的短肽標簽；所述短肽標簽選自由Flag、His、Myc和HA所組成的組中的一種或兩種。

6.根據(jù)權利要求1或2所述的CD3抗原，其中，所述CD3抗原能與抗CD3的抗體OKT3、UCHT1、TRX4和L2K特異性結(jié)合。

7.權利要求1-6所述的CD3抗原的制備方法，所述方法包括：

（1）分別構建重組載體e和重組載體d，或者分別構建重組載體e和重組載體g；

（2）在真核細胞中轉(zhuǎn)染重組載體e和d，或者轉(zhuǎn)染重組載體e和g；

（3）利用親和層析方法純化獲得CD3抗原CD3E/CD3D-LZ或者CD3E/CD3G-LZ；

其中，所述重組載體e含有融合蛋白CD3E?ECD-LZ1的編碼核苷酸序列；所述重組載體g含有融合蛋白CD3G?ECD-LZ2的編碼核苷酸序列；所述重組載體d含有融合蛋白CD3D?ECD-LZ2的編碼核苷酸序列。

8.根據(jù)權利要求7所述的CD3抗原的制備方法，其中，所述真核細胞為HEK293、293E、293F、COS7或CHO-S細胞。

9.權利要求1-7所述的CD3抗原在抗CD3抗體的研究中的應用。

10.權利要求1-7所述的CD3抗原在抗原抗體相互作用研究中的應用。