[發明專利]一種發光菌的凍干保護劑

有效

• 申請號: 201310439886.5
• 申請日: 2013-09-25
• 公開（公告）號: CN103468572A
• 公開（公告）日: 2013-12-25
• 發明（設計）人: 袁恒
• 申請（專利權）人: 北京尚洋東方環境科技股份有限公司
• 主分類號: C12N1/04
• 分類號: C12N1/04
• 代理公司: 北京瑞思知識產權代理事務所(普通合伙) 11341
• 代理人: 王加嶺

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種發光菌的凍干保護劑的制備及在發光菌凍干粉制備上的應用。

背景技術

發光細菌是進行生物發光的一類細菌。其多數為海生，與發光浮游生物同是引起海面發光的原因。發光菌形態雖多種多樣，但生理特性卻非常相似。一般對明膠不產生液化，分解蛋白質后不形成毒物，常寄生在各種動物體上引起“發光病”，即寄生發光。目前，國內常用的3種發光細菌為：明亮發光桿菌、費氏弧菌、青海弧菌。

其中，明亮發光桿菌是革蘭氏陰性菌,可在水質急性毒性的測定中所使用。費氏弧菌是一種生長在海洋中的革蘭氏陰性菌，普遍存在于海洋環境及海洋生物體中，是某些海洋魚類的致病菌。研究人員發現當菌群密度達到一定閾值時費氏弧菌會產生集體發光現象；后來的研究表明此生物發光現象是因為其自誘導劑的積累引起的；費氏弧菌通過該自誘導劑進行相互交流，啟動相關基因的表達，從而引起其表型的變化。任何對細胞代謝機制的抑制作用，如各種無機毒物與有機毒物，都會導致其發光的減少，所以費氏弧菌目前被普遍作為環境測試指標。青海弧菌能持續穩定地發射藍綠光（最大發射波長485nm），一旦遭遇有毒有害物質，很快會被抑制發光，其發光抑制程度與所受的有毒有害物質的毒性及濃度有對應關系，且它是一種淡水菌，所以被廣泛應用于飲用水監測中。

國際上20世紀八十年代初，開始使用發光菌檢測環境水質污染狀況。我國于1995年開始推薦使用海洋發光菌，作為環境水質污染監測的生物學方法之一。上述發光菌常以菌液、菌膜或凍干粉的形式在環境監測中出現；而凍干粉因保質期長、便于運輸、使用方便，是最常用的保存手段。目前，關于發光細菌凍干粉復合保護劑的研究不多，現在常用的保護劑保護率較低，導致干粉中活菌數較小和復蘇速度緩慢，且發光強度不穩定，不利于發光菌凍干粉在監測中的應用。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明的一個目的是提供一種能有效提高發光菌凍干粉的含菌量的凍干保護劑。

為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

本發明提供的發光菌的凍干保護劑，其包括如下重量份數的主要原料：半乳糖42～55份，海藻糖19～26份，脫脂乳98～105份。

優選，其包括如下重量份數的主要原料：乳糖50份，海藻糖25份，脫脂乳104份。

本發明的另一個目的是上述凍干保護劑在制備發光菌凍干粉中的應用。

上述應用，包括以下步驟：

1）制成每升中含有半乳糖42～55g、海藻糖19～26g、脫脂乳98～105g的凍干保護劑；

2）按凍干保護劑體積：菌液體積為1：7～13將凍干保護劑添加到菌液中，沖懸均勻后分裝；

3）將分裝好的菌液放入凍干機中，凍干10h。

優選為，上述應用包括以下步驟：

1）制成每升中含有半乳糖42～55g、海藻糖19～26g、脫脂乳98～105g的凍干保護劑；

2）按凍干保護劑體積：菌液體積為1：8將凍干保護劑添加到菌液中，沖懸均勻后分裝；

3）將分裝好的菌液放入凍干機中，凍干10h。

上述應用還包括以下步驟：

1）將發光菌的凍干粉用3%NaCl溶液進行溶解，復蘇10min，接種到液體培養基中，25℃，180rpm培養18h；

2）取復蘇好的菌液，接種到液體培養基中，25℃，180rpm培養18h；

本發明提供的發光菌凍干粉的保護劑，有效提高了發光菌凍干粉的含菌量，使其可以達到1×10⁹CFU/g，且通過本發明的凍干保護劑制備的發光菌的凍干粉復蘇速度快、發光強度穩定。有利于發光菌凍干粉的生產研究以及在環境監測中的應用，有效提高了發光菌凍干粉的經濟效益。

附圖說明

圖1是發光菌的凍干粉復蘇時間與發光強度結果圖。

具體實施方式

以下實施例用于進一步說明本發明，但不應理解為對本發明的限制。在不背離本發明精神和實質的前提下，對本發明所作的修飾或者替換，均屬于本發明的范疇。

實施例1發光菌凍干粉中含菌量的對比試驗

制備不同配比的發光菌保護劑，用于對比試驗，各實驗組的具體成分見表1：

表1：發光菌保護劑的成分