[發明專利]一種聚乳酸-聚乙二醇-腫瘤穿透肽復合物及制備和應用

有效

• 申請號: 201310437613.7
• 申請日: 2013-09-24
• 公開（公告）號: CN103536930A
• 公開（公告）日: 2014-01-29
• 發明（設計）人: 閆志強;楊一祎;魏岱旭;鐘建;劉璐;金彩虹;何丹農
• 申請（專利權）人: 上海納米技術及應用國家工程研究中心有限公司
• 主分類號: A61K47/42
• 分類號: A61K47/42;A61K9/107;A61K9/14;A61P35/00;C08G81/00
• 代理公司: 上海東方易知識產權事務所 31121
• 代理人: 唐莉莎

技術領域

本發明屬藥物制劑領域，涉及一種聚乳酸-聚乙二醇-腫瘤穿透肽復合物PLA-PEG-iNGR，具體說是一種具有腫瘤穿透性能的靶向聚合物材料及制備和應用。

背景技術

腫瘤是威脅人類健康和生命的主要疾病，近年來其發病率呈明顯上升趨勢。目前臨床上對腫瘤的常規治療方法是切除腫瘤原發灶和實施淋巴清掃之后，進行全身化療或放療。但是，外科手術不能徹底清除腫瘤細胞和腫瘤轉移淋巴結，易導致腫瘤復發，或者不適用于某些特殊病人或特殊部位的腫瘤；放療往往會引起患者嚴重的局部皮膚反應、血象變化、局部粘膜反應等；傳統化療藥物靜注給藥后，對腫瘤組織無選擇性，具有嚴重的全身性毒副作用。腫瘤細胞或腫瘤血管內皮細胞上表達有一系列特異性受體，利用其配體修飾生物相容性材料而制備得到的腫瘤靶向材料，由于其在體內可主動尋靶定位至腫瘤組織而受到研究者的廣泛關注。但是由于腫瘤靶向性能差、藥效提高不明顯等問題，目前絕大部分腫瘤靶向材料仍未進入臨床應用。因此，研究開發高性能腫瘤靶向材料、提高對腫瘤的靶向性能和治療效果迫在眉睫。

iNGR多肽是近期設計出來的一種腫瘤穿透肽，它由腫瘤血管靶向多肽NGR連接腫瘤穿透序列而成。NGR與iNGR均可以靶向至腫瘤血管，但后者與向前相比的優勢在于其能滲透進入腫瘤組織。iNGR與NGR均為血管內皮細胞上CD13的特異性配體，此外，iNGR通過降解后，還可與神經氈蛋白-1受體特異性結合，從而介導其腫瘤穿透行為。目前尚未見利用iNGR多肽修飾的靶向材料的報道。

本發明采用iNGR修飾PLA-PEG，合成具有穿透腫瘤血管和腫瘤組織能力的腫瘤靶向材料，為制備具有腫瘤穿透性能的藥物載體提供物質基礎。

發明內容

為了克服現有技術的不足，本發明提供一種聚乳酸-聚乙二醇-腫瘤穿透肽復合物及制備和應用。

一種聚乳酸-聚乙二醇-腫瘤穿透肽復合物，其特征在于，所述復合物是由聚乳酸（PLA）、聚乙二醇（PEG）和具有腫瘤穿透性能的靶向多肽iNGR三部分通過共價連接而成的線性嵌段共聚物（縮寫為PLA-PEG-iNGR），三者的摩爾比例為1:?1:?1。

所述的腫瘤穿透肽iNGR的氨基酸序列為CRNGRGPDC，其使復合物具有了腫瘤穿透性能。

所述的聚乙二醇的重均分子量為1800～3800。

所述的聚乳酸的重均分子量為1000～5000。

所述的腫瘤穿透肽通過共價鍵形式與聚乙二醇-聚乳酸連接而成的復合物。

所述聚乳酸-聚乙二醇提供一個馬來酰亞胺基，腫瘤穿透肽提供一個游離巰基，兩者發生加成反應而連接成共價復合物。

一種制備所述聚乳酸-聚乙二醇-腫瘤穿透肽復合物的方法，其特征在于該方法的具體步驟是：

（1）采用固相多肽合成法合成C端外接半胱氨酸（Cys）的靶向多肽C-iNGR（2Acm）（氨基酸序列為C-C（Acm）RNGRGPDC（Acm）），將其溶于pH7.0的磷酸鹽緩沖液（PBS）中備用；

（2）取馬來酰亞胺-聚乙二醇-聚乳酸復合物（PLA-PEG-Mal）溶于乙腈中，旋轉蒸發成膜，加入PBS（pH?8.0,?0.2M）在37℃水化形成膠束；加入過量的C-iNGR（2Acm）并反應過夜，透析（分子量3kDa）去除過量的多肽與鹽，冷凍干燥，得到PLA-PEG-iNGR（2Acm）；

（3）將PLA-PEG-iNGR（2Acm）其溶于甲醇中，加入檸檬酸溶液和1M的鹽酸溶液，后逐滴加入碘甲醇溶液使溶液始終保持微黃色持續反應2hr，反應結束后加入適量抗壞血酸溶液使微黃色褪去，反應液透析除去鹽類（截留分子量3.5kDa，透析介質為水），冷凍干燥得到PLA-PEG-iNGR。

一種聚乳酸-聚乙二醇-腫瘤穿透肽復合物在制備膠束、納米粒等藥物載體中的應用。

上述的PLA-PEG-iNGR復合物可用于制備具有腫瘤穿透性能的藥物載體，如膠束、納米粒等，這些藥物載體靜脈注射進入腫瘤動物模型體內之后，與普通藥物載體相比，表現出良好的腫瘤靶向性和腫瘤穿透性能，其在腫瘤部位分布明顯增加，免疫熒光分析結果顯示能穿透腫瘤血管滲透進入整個腫瘤組織。

附圖說明

附圖1、PLA-PEG-iNGR的核磁圖譜。

圖中1為PLA-PEG-Mal的核磁圖譜，2為PLA-PEG-iNGR的核磁圖譜，由圖可看出，1圖顯示出馬來酰亞胺峰，而2圖中該峰消失，而其余峰基本保持不變，顯示PLA-PEG-Mal中的馬來酰亞胺基團已與iNGR發生反應。