[發明專利]一種提高川貝母細胞同步化的誘導方法

有效

• 申請號: 201310436772.5
• 申請日: 2013-09-24
• 公開（公告）號: CN103468633A
• 公開（公告）日: 2013-12-25
• 發明（設計）人: 薛剛;王躍華;余強;王曉蓉
• 申請（專利權）人: 薛剛
• 主分類號: C12N5/04
• 分類號: C12N5/04
• 代理公司: 成都金英專利代理事務所(普通合伙) 51218
• 代理人: 袁英

1.一種提高川貝母細胞同步化的誘導方法，其特征在于：它包括以下步驟：

S1：將由川貝母鱗片葉誘導產生的愈傷組織切成0.5～2cm²的大小轉接到產生疏松愈傷組織的培養基中進行培養，pH值為5.6～6.5，培養條件：溫度20～25℃，每天光照8～12h，光照強度為1000～1800lx；

S2：將S1步驟獲得的疏松愈傷組織按5～20g·L^-1的接種量接入MS+KT?0.5～1.0mg·L^-1+2，4-D?0.5～2.0mg·L^-1+蔗糖10～25g·L^-1的液體培養基中進行懸浮培養，pH值為5.5～6.0，培養條件：溫度18～22℃，每天光照6～10h，光照強度為600～1000lx，搖床轉速為80～100r/min的條件下，進行20～30天繼代培養1次；

S3：在S2步驟的懸浮培養過程中，選取在第三次繼代培養基中添加1～3mmol/L的腺嘌呤核苷培養處理細胞10～18h，再更換在不加腺嘌呤核苷的培養基中繼續培養1周；接著向培養基中通入氦氣并保持壓力為50～80磅/英寸²，在20～25℃的培養條件下培養12～24h后放出氦氣；

S4：將S3步驟處理完畢的細胞轉接入MS+NAA?0.1～0.5mg·L^-1+KT?0.1～0.5mg·L^-1+蔗糖20～40g·L^-1+甘油5～20%的液體培養基中，在1～5℃的低溫條件下培養12～24h后再放在溫度為18～22℃條件下恢復培養24～48h。

2.根據權利要求1所述的一種提高川貝母細胞同步化的誘導方法，其特征在于：S1步驟中所述的培養基為：MS+6-BA?0.1～0.5mg·L^-1+NAA?0.1～1.0mg·L^-1+2，4-D?1.0～4.0mg·L^-1+蔗糖30～50g·L^-1+瓊脂4.5～6.0g·L^-1。

3.根據權利要求1所述的一種提高川貝母細胞同步化的誘導方法，其特征在于：S1步驟中培養條件：溫度20℃，每天光照12h，光照強度為1600lx。

4.根據權利要求1所述的一種提高川貝母細胞同步化的誘導方法，其特征在于：S2步驟中培養條件：溫度20℃，每天光照8h，光照強度為800lx。

5.根據權利要求1所述的一種提高川貝母細胞同步化的誘導方法，其特征在于：S3步驟中向培養基中通入氦氣并保持壓力為60磅/英寸²，在22℃的培養條件下培養20h后放出氦氣。

6.根據權利要求1所述的一種提高川貝母細胞同步化的誘導方法，其特征在于：S4步驟中培養條件：在3℃的低溫條件下培養20h后再放在溫度為20℃條件下恢復培養48h。

7.根據權利要求1所述的一種提高川貝母細胞同步化的誘導方法，其特征在于：在經過S4步驟處理后，取已處理過的細胞用滴管吹吸，將細胞打散混勻，滴1滴細胞懸液于冷凍干燥后的載玻片上，用席夫式染液染色制片，經顯微鏡觀察并計算出分裂指數。