[發明專利]一種高純度胸腺肽的制備方法

無效

• 申請號: 201310434623.5
• 申請日: 2013-09-23
• 公開（公告）號: CN103450356A
• 公開（公告）日: 2013-12-18
• 發明（設計）人: 楊春輝;李靈娟;柴保國;呂鳳霞;張軍強
• 申請（專利權）人: 河南牧翔動物藥業有限公司
• 主分類號: C07K14/575
• 分類號: C07K14/575;C07K1/34
• 代理公司: 鄭州聯科專利事務所(普通合伙) 41104
• 代理人: 田小伍

技術領域

本發明屬于生物藥品制備技術領域，具體涉及一種高純度胸腺肽的制備方法。

背景技術

胸腺肽是從冷凍的牛胸腺中經提取、部分變性、超濾等工藝過程制備出的一種具有高活力的混合肽，具有免疫調節作用。傳統的胸腺肽制備工藝通常是將清理后的小牛胸腺等經過絞肉機破碎，加入pH2.0-4.0的緩沖溶液超聲破碎并加熱勻漿后沉淀蛋白，離心用濾紙或者大孔徑30KDa濾芯進行過濾，上述的原料來源質量不穩定，且工藝不夠精簡，浪費較多的原料，得到的胸腺肽含有較多的大分子蛋白，純度不高。

發明內容

本發明的目的在于提供一種高純度胸腺肽的制備方法。

為實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種高純度胸腺肽的制備方法，包括以下步驟：

（1）將處理過的胎牛胸腺與pH為2.5-3.5的純化水按照質量比為1∶（1-3）的比例進行混合，置于縫隙為8-9μm的膠體磨中研磨得勻漿液，用鹽酸調節勻漿液pH為2.5-3.5，再進行研磨，得胸腺勻漿；

（2）加熱胸腺勻漿至78-82℃，保溫時間≥10min，冷卻后用NaOH調節胸腺勻漿pH為6.5-6.8，然后在4000-6000r/min下離心30-45min，棄去沉淀，取上清液；

（3）用6000道爾頓的超濾膜對上清液進行超濾，得胸腺肽超濾液；

（4）濃縮超濾液，胸腺肽濃縮液體積≥原超濾液體積的1/2，濃縮溫度≤60℃；同時，較好的胸腺肽濃縮液的體積≤原超濾液體積的5/7。

（5）用6000道爾頓的超濾膜對胸腺肽濃縮液進行超濾，即得高純度胸腺肽溶液。

上述方法中，步驟（1）所述胎牛胸腺處理方法為：將冷凍健康的新鮮胎牛胸腺置于純化水中融化，水溫≤40℃，再用純化水沖洗至無明顯血色，控干水分，剝離脂肪、筋膜及結締組織后，用純化水漂洗，控干水分。

較好的，步驟（1）中純化水的pH用鹽酸進行調節；胎牛胸腺和純化水的質量比為1∶1。

上述方法步驟（2）中所述NaOH為10wt%的NaOH水溶液，所述加熱在水浴罐中進行，冷卻為水浴冷卻，冷卻溫度至25℃。

本發明方法簡單，操作簡便，制得的胸腺肽純度高、活性強，適于大規模生產。

具體實施方式

下面結合實施例對本發明作進一步的解釋說明，但本發明的保護范圍并不僅限于此。

實施例1

（1）取5kg冷凍的新鮮胎牛胸腺置于40℃純化水中融化，再用純化水沖洗至無明顯血色，控干水分，剝離脂肪、筋膜及結締組織后，用純化水漂洗3次，控干水分；

（2）將處理過的胎牛胸腺與pH為3.5的純化水按照質量比為1∶3的比例進行混合，置于縫隙為9μm的膠體磨中研磨得勻漿液，用30%鹽酸（v/v）調節勻漿液pH為3.5，再進行研磨一次，得胸腺勻漿；

（3）在水浴罐中加熱胸腺勻漿至82℃，保溫時間10min，冷卻后用質量濃度為10%的NaOH水溶液調節胸腺勻漿pH為6.8，然后在6000r/min下離心30min，棄去沉淀，取上清液；

（4）用6000道爾頓的超濾膜對上清液進行超濾，得胸腺肽超濾液；

（5）濃縮超濾液，胸腺肽濃縮液體積為原超濾液體積的1/2，濃縮溫度為60℃；

（6）用6000道爾頓的超濾膜對胸腺肽濃縮液進行超濾，得到的高純度胸腺肽溶液，其中胸腺肽的含量為16mg/ml。

實施例2

（1）取10kg冷凍的新鮮胎牛胸腺置于30℃純化水中融化，再用純化水沖洗至無明顯血色，控干水分，剝離脂肪、筋膜及結締組織后，用純化水漂洗4次，控干水分；

????????（2）將處理過的胎牛胸腺與pH為2.5的純化水按照質量比為1∶1的比例進行混合，置于縫隙為8μm的膠體磨中研磨得勻漿液，用20%鹽酸（v/v）調節勻漿液pH為2.5，再進行研磨一次，得胸腺勻漿；

（3）在水浴罐中加熱胸腺勻漿至78℃，保溫時間20min，冷卻后用質量濃度為10%的NaOH水溶液調節胸腺勻漿pH為6.5，然后在4000r/min下離心45min，棄去沉淀，取上清液；

（4）用6000道爾頓的超濾膜對上清液進行超濾，得胸腺肽超濾液；

（5）濃縮超濾液，胸腺肽濃縮液體積為原超濾液體積的2/3，濃縮溫度為50℃；

（6）用6000道爾頓的超濾膜對胸腺肽濃縮液進行超濾，得到的高純度胸腺肽溶液，其中胸腺肽的含量為24mg/ml。