[發(fā)明專利]一種檢測(cè)CYP2D6基因多態(tài)性的試劑盒及方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310433443.5
• 申請(qǐng)日: 2013-09-22
• 公開（公告）號(hào): CN103468815A
• 公開（公告）日: 2013-12-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉輝
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 劉輝
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 北京五洲洋和知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11387
• 代理人: 劉春成;吳芳

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及基因測(cè)序技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種檢測(cè)CYP2D6基因多態(tài)性的試劑盒及方法。

背景技術(shù)

細(xì)胞色素P450（CYP450）是由亞鐵血紅素-硫醇鹽蛋白組成的主要分布在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和線粒體內(nèi)膜上一類基因家族，除了參與生物體內(nèi)的甾醇類激素合成以外，還可以參與體內(nèi)的內(nèi)源性物質(zhì)和外源性物質(zhì)的代謝。細(xì)胞色素P450的結(jié)構(gòu)、功能以及在藥物代謝中的作用在國內(nèi)外均得到了較廣泛的研究。在遺傳藥理學(xué)上具有重要意義的細(xì)胞色素P450家族中，由CYP2D6基因編碼酶是其成員之一，該基因位于22q13.1。研究表明在臨床上它參與了如異喹胍(腎上腺素能阻斷藥物)、司巴丁和普羅帕酮(抗心律失常藥物)以及阿米替林（抗抑郁藥）等25%以上的常用藥物的代謝。CYP2D6是所有參與藥物代謝的細(xì)胞色素P450基因家族中唯一不能被誘導(dǎo)的酶，已知的等位基因變異就超過了90個(gè)，目前已經(jīng)報(bào)道有105種，造成了不同的CYP2D6基因多態(tài)性，CYP2D6基因多態(tài)性具體詳見CYP等位基因數(shù)據(jù)庫（http://www.cypalleles.ki.se），而CYP2D6基因多態(tài)性對(duì)酶的個(gè)體活性有重要影響，其中某些產(chǎn)生弱代謝表型，使代謝能力下降，如CYP2D6*3、CYP2D6*4、CYP2D6*5、CYP2D6*6、CYP2D6*7等基因多態(tài)性。CYP2D6基因的兩種正常基因型為CYP2D6*1、CYP2D6*2（C2850T突變）。CYP2D6酶對(duì)司巴丁、美托洛爾和異喹胍等藥物的代謝在高加索和東方人中是獨(dú)立的，且藥物間不存在相互作用，而對(duì)一些非洲人群，上述藥物之間卻存在一定的相互作用，其原因可能是CYP2D6基因多態(tài)性和干擾性藥物、飲食結(jié)構(gòu)等因素的作用。目前，在歐洲人群中共檢測(cè)出有53種不同的CYP2D6等位基因。研究表明，異喹胍等藥物慢代謝者是具有某些缺陷等位基因，如CYP2D6*3，由于發(fā)生2549delA，導(dǎo)致編碼蛋白質(zhì)出現(xiàn)框移，致使酶的活性喪失，還如CYP2D6*9，由于發(fā)生三聯(lián)體密碼子2615_2617delAAG缺失，盡管未發(fā)生框移，但導(dǎo)致編碼氨基酸缺乏使產(chǎn)生的活性較低，再比如CYP2D6*4為C100T和G1846A共同突變，CYP2D6*5為整個(gè)基因缺失突變，CYP2D6*10為C100T突變，另外，還有些為整個(gè)基因的重復(fù)突變。研究表明，CYP2D6基因多態(tài)性在不同種族人群中的分布頻率具有較大的差異，在東方人中尚未發(fā)現(xiàn)CYP2D6*3和CYP2D6*4基因多態(tài)性，CYP2D6*5的突變頻率與高加索人和非洲人差不多，但在東方人中發(fā)現(xiàn)了CYP2D6*10基因多態(tài)性，在東方人群中的突變頻率高達(dá)50%，這種基因多態(tài)性是導(dǎo)致東方人CYP2D6酶活性降低的主要原因。

現(xiàn)有技術(shù)中采用直接測(cè)序法檢測(cè)CYP2D6基因多態(tài)性，即首先采用PCR（Polymerase?Chain?Reaction，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）擴(kuò)增不同的目的片段后，回收純化PCR產(chǎn)物，然后進(jìn)行測(cè)序。

由于直接測(cè)序法的檢測(cè)時(shí)間過長，一般需要48個(gè)小時(shí)以上，使該檢測(cè)的效率降低，因此，為檢測(cè)CYP2D6基因多態(tài)性帶來不便。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中檢測(cè)CYP2D6基因多態(tài)性的時(shí)間長、步驟繁瑣、需要多次PCR的問題，本發(fā)明的目的在于提供一種檢測(cè)CYP2D6基因多態(tài)性的試劑盒。

本發(fā)明的另一目的在于提供一種檢測(cè)CYP2D6基因多態(tài)性的方法。

為了解決現(xiàn)有技術(shù)中檢測(cè)CYP2D6基因多態(tài)性的時(shí)間長、步驟繁瑣、需要多次PCR的問題，本發(fā)明提采用了以下技術(shù)方案：

一種檢測(cè)CYP2D6基因多態(tài)性的試劑盒，包括，其特征在于，所述檢測(cè)用引物包括：CYP2D6基因第1外顯子至第9外顯子的全長擴(kuò)增特異性引物，以及CYP2D6基因第1外顯子上下游測(cè)序引物、CYP2D6基因第2外顯子上下游測(cè)序引物、CYP2D6基因第3～4外顯子上下游測(cè)序引物、CYP2D6基因第5～7外顯子上下游測(cè)序引物和CYP2D6基因第8～9外顯子上下游測(cè)序引物中的至少一對(duì)，其中：

所述CYP2D6基因第1外顯子至第9外顯子的全長擴(kuò)增特異性引物的上游引物序列如序列表中SEQ?ID?NO:1所示；

所述CYP2D6基因第1外顯子至第9外顯子的全長擴(kuò)增特異性引物的下游引物序列如序列表中SEQ?ID?NO:2所示；

所述CYP2D6基因第1外顯子測(cè)序引物的上游引物序列如序列表中SEQ?ID?NO:3所示；

所述CYP2D6基因第1外顯子測(cè)序引物的下游引物序列如序列表中SEQ?ID?NO:4所示；