[發明專利]美人蕉黃斑駁病毒熒光定量PCR檢測試劑盒及其檢測方法

有效

• 申請號: 201310432638.8
• 申請日: 2013-09-22
• 公開（公告）號: CN103571970A
• 公開（公告）日: 2014-02-12
• 發明（設計）人: 沈建國;李敏;張總澤;蔡偉;廖富榮
• 申請（專利權）人: 福建出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/94
• 代理公司: 福州智理專利代理有限公司 35208
• 代理人: 丁秀麗

1.一種美人蕉黃斑駁病毒熒光定量PCR檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括：1）正向引物：10μmol/L，引物序列為5’-TGCGAACCTGCCTGAAATG-3’；2）反向引物：10μmol/L，引物序列為5’-ATACATCCGTCTGTTTCAAGTACCAT-3’；3）熒光探針：10μmol/L，熒光探針序列為5’-FAM-AATTACCCCCCAGGGACGCCG-TAMRA-3’，熒光探針5’端標記的熒光報告基團是FAM，3’端標記的熒光淬滅基團是TAMRA；4）TaqMan?PCR?Master?Mix：2×；5）美人蕉黃斑駁病毒的陽性對照樣品；6）不含美人蕉黃斑駁病毒的陰性對照樣品；7）ddH₂O。

2.利用權利要求1所述的美人蕉黃斑駁病毒熒光定量PCR檢測試劑盒的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）熒光定量PCR反應：在PCR管中加入待測樣品DNA?3μL，按每管加濃度為10μmol/L正向引物0.75μL、濃度為10μmol/L反向引物0.75μL、濃度為10μmol/L熒光探針0.5μL、2×TaqMan?PCR?Master?Mix?12.5μL、ddH₂O?7.5μL，使反應總體積為25μL；混合后的反應液，95℃預變性30s，然后95℃?5s、60℃?30s，如此共40個循環，反應結束；

2）結果判定：反應結束后根據擴增曲線判定結果，若待測樣品產生典型的擴增曲線，且Ct值小于35，則判定檢測到美人蕉黃斑駁病毒，反之，則判定未檢測到美人蕉黃斑駁病毒。