[發(fā)明專利]一種制備中國被毛孢成熟分生孢子的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310432574.1
• 申請日: 2013-09-22
• 公開（公告）號: CN103667170A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發(fā)明（設計）人: 朱志鋼;梁關海;梁蕾;朱新燕;李文佳;謝俊杰;蔣均才;華獻春
• 申請（專利權）人: 乳源南嶺好山好水冬蟲夏草有限公司;宜昌山城水都冬蟲夏草有限公司
• 主分類號: C12N3/00
• 分類號: C12N3/00
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 趙青朵;馮瓊

本申請要求于2012年09月20日提交中國專利局、申請?zhí)枮?01210355665.5、發(fā)明名稱為“一種制備中國被毛孢成熟分生孢子的方法”的中國專利申請的優(yōu)先權，其全部內容通過引用結合在本申請中。

技術領域

本發(fā)明涉及微生物領域，具體的說是涉及一種制備中國被毛孢成熟分生孢子的方法。

背景技術

冬蟲夏草是冬蟲夏草菌(Cordyceps?sinensis)感染并寄生在蝙蝠蛾科昆蟲幼蟲上長出的子座（子實體）及幼蟲蟲體的復合體，屬于可食用的真菌，是我國一種傳統(tǒng)的名貴滋補中藥材，有調節(jié)免疫系統(tǒng)功能、抗腫瘤、抗疲勞等多種功效。

野生的冬蟲夏草僅生長在青藏高原海拔3000-5000米的高山草甸、高原草甸等高寒植被中，由于近年來過度采挖使其產量下降，其價格與20多年前相比已經上漲了1000多倍。因此，我國科研人員一直在進行利用冬蟲夏草菌侵染蝙蝠蛾幼蟲人工培植冬蟲夏草來替代野生冬蟲夏草的產業(yè)化研究，力圖讓昂貴的冬蟲夏草能夠走進尋常百姓家。冬蟲夏草要完成產業(yè)化，首先必須找到它正確的菌種，然后利用冬蟲夏草菌來侵染蝙蝠蛾幼蟲，進而培植出冬蟲夏草。經過多年的研究，冬蟲夏草菌被鑒定為中國被毛孢，又稱為蝙蝠蛾被毛孢。

人工培植冬蟲夏草主要是采用中國被毛孢的菌絲體來侵染蝙蝠蛾幼蟲，但是這種常規(guī)侵染方法的侵染率不高，使得培植冬蟲夏草的成功率受到影響，阻礙了冬蟲夏草的產業(yè)化發(fā)展。隨著對人工培植冬蟲夏草技術領域的不斷探索，有研究表明采用中國被毛孢成熟的分生孢子來侵染蝙蝠蛾幼蟲能夠明顯提高侵染率。因此，人工制備中國被毛孢菌成熟分生孢子的過程就成為影響人工培植冬蟲夏草成功率的重要環(huán)節(jié)。

目前只有為數不多的有關利用中國被毛孢來制備分生孢子的報道，如文獻“不同因子對冬蟲夏草真菌產生分生孢子的研究”（李玉玲，《食用菌》2002年第5期），其論述了中國被毛孢在不同培養(yǎng)基、不同光照以及不同溫度下產生分生孢子的研究；又如文獻“冬蟲夏草菌的動態(tài)產孢量及抗異能力”（王偉，楊博，蔡世亮等，《中草藥》2002年第33卷第1期），其在文中論述了冬蟲夏草菌在PDA、查氏、薩氏培養(yǎng)基中產孢量的研究，但是利用上述文獻中的方法所得到的分生孢子數量不高，只分別達到10⁵和10⁷數量級的孢子數，且并未說明所得分生孢子是否成熟散落。因此，提供一種能夠提高中國被毛孢成熟分生孢子數量的分生孢子制備方法，有利于人工培植冬蟲夏草產業(yè)化的發(fā)展。

發(fā)明內容

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種制備中國被毛孢成熟分生孢子的方法，使得該方法能夠提高中國被毛孢成熟分生孢子的數量。

為了實現上述目的，本發(fā)明提供如下技術方案：

一種制備中國被毛孢成熟分生孢子的方法，將中國被毛孢菌落接種于培養(yǎng)基上，在14-20℃溫度和65-90%相對濕度的條件下進行菌絲培養(yǎng)35-55天，然后轉至10-15℃溫度和65-90%相對濕度的條件下誘導分生孢子20-40天，即得中國被毛孢菌成熟分生孢子，所述培養(yǎng)基由60-65mL/100mL質量百分數為1-5%的麩皮液、0.5-1.5g/100mL的蛋白胨、0.5-1.5g/100mL的酵母粉、2-4g/100mL的葡萄糖、30-40g/100mL的大米和25-35mL/100mL的攪拌均勻的雞蛋液組成，余量水補足。

本發(fā)明所述方法采用的中國被毛孢可以通過市售獲得，或利用本領域常規(guī)技術手段從野生的冬蟲夏草上分離獲得，所接種的中國被毛孢菌落可通過本技術領域常規(guī)方法培養(yǎng)獲得，利用擴繁的菌落接種有利于菌絲和分生孢子的生長，這在本領域是公知的。

本發(fā)明所述培養(yǎng)基優(yōu)選由65mL/100mL質量百分數為2%的麩皮液、1g/100mL的蛋白胨、1g/100mL的酵母粉、3g/100mL的葡萄糖、35g/100mL的大米和30mL/100mL的攪拌均勻的雞蛋液組成，余量水補足。其中，所述質量百分數為1-5%的麩皮液可以是每100mL水中加入1-5g麩皮浸泡然后過濾所得的濾液，也可以是攪拌均勻的每100mL水中加入1-5g麩皮的混合液，而作為優(yōu)選，所述質量百分數為1-5%的麩皮液由以下方法獲得：

每100mL水中加入1-5g麩皮，煮沸30min后過濾所得的濾液即為質量百分數為1-5%的麩皮液。