[發明專利]一種抗副豬嗜血桿菌的豬源嵌合抗體及其構建方法和應用

有效

• 申請號: 201310431967.0
• 申請日: 2013-09-22
• 公開（公告）號: CN103570832A
• 公開（公告）日: 2014-02-12
• 發明（設計）人: 李曦;符芳;柴政;田華彬
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所
• 主分類號: C07K16/12
• 分類號: C07K16/12;C12N15/13;C12N15/866;G01N33/569;A61K39/40;A61P31/04
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨;費碧華

1.一種抗副豬嗜血桿菌的豬源嵌合抗體，其特征在于所述的抗體由一條輕鏈和一條重鏈通過二硫鍵和非共價鍵聯結而成，所述的輕鏈從N端到C端依次包括鼠源抗副豬嗜血桿菌單抗輕鏈可變區和豬IgG輕鏈恒定區，所述的重鏈依次包括鼠源抗副豬嗜血桿菌單抗重鏈可變區和豬IgG重鏈恒定區。?

2.如權利要求1所述的豬源嵌合抗體，其特征在于所述的鼠源抗副豬嗜血桿菌單抗輕鏈可變區的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示，所述的豬IgG輕鏈恒定區的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所示，所述的鼠源抗副豬嗜血桿菌單抗重鏈可變區的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.3所示，所述的豬IgG重鏈恒定區的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.4所示。?

3.如權利要求1或2所述的豬源嵌合抗體，其特征在于在所述的輕鏈和重鏈的N端還包括信號肽序列，優選的，所述的輕鏈的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.5所示，所述的重鏈的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.6所示。?

4.編碼權利要求1-3任一項所述豬源嵌合抗體的核苷酸序列。?

5.如權利要求4所述的核苷酸序列，其特征在于編碼鼠源抗副豬嗜血桿菌單抗輕鏈可變區的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.7所示，編碼豬IgG輕鏈恒定區的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.8所示，編碼鼠源抗副豬嗜血桿菌單抗重鏈可變區的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.9所示，編碼豬IgG重鏈恒定區的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.10所示。?

6.如權利要求4所述的核苷酸序列，其特征在于在編碼輕鏈和重鏈的核苷酸序列的5’端還分別連有編碼信號肽序列的核苷酸序列，優選的，編碼輕鏈的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.11所示，編碼重鏈的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.12所示。?

7.一種表達載體，其特征在于含有權利要求4-6任一項所述的核苷酸序列。?

8.如權利要求7所述的表達載體，其特征在于所述的表達載體為桿狀病毒表達載體，優選的，所述的表達載體是在雙向表達載體pFast-Bac-Dual的基礎上構建得到的。?

9.一種表達權利要求1所述的抗副豬嗜血桿菌的豬源嵌合抗體的方法，其特征在于包括以下步驟：?

（1）構建用于表達抗副豬嗜血桿菌的豬源嵌合抗體的桿狀病毒表達載體，其中編碼豬源嵌合抗體輕鏈的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.11所示，編碼豬源嵌合抗體重鏈的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.12所示；?

（2）將構建得到的桿狀病毒表達載體轉染昆蟲細胞并進行桿狀病毒的組裝；?

（3）獲得的桿狀病毒接種昆蟲細胞，當細胞病變達到80-90%，收獲桿狀病毒感染的細胞培養物，純化，即得。?

10.如權利要求7所述的方法，其特征在于所述的桿狀病毒表達載體是在雙向表達載體pFast-Bac-Dual的基礎上構建得到的，所述的編碼豬源嵌合抗體輕鏈的核苷酸序列以及編碼豬源嵌合抗體重鏈的核苷酸序列分別各自位于pFast-Bac-Dual上的PPH啟動子或p10啟動子的下游，所述的昆蟲細胞為sf-900Ⅱ。?

11.權利要求1-3任一項所述的抗副豬嗜血桿菌的豬源嵌合抗體在制備檢測或預防副豬嗜血桿菌感染試劑或藥物中的應用。?

12.權利要求5或6所述的表達載體在制備抗副豬嗜血桿菌的豬源嵌合抗體中的應用。?