[發明專利]一種評價生物蛋白對綠盲蝽影響的方法無效

申請號：	201310429417.5	申請日：	2013-09-18
公開（公告）號：	CN103609529A	公開（公告）日：	2014-03-05
發明（設計）人：	王英麗;梁革梅;魏紀珍;袁向東;張麗麗;謝丙堂;鐘豐	申請（專利權）人：	中國農業科學院植物保護研究所
主分類號：	A01K67/033	分類號：	A01K67/033;A23K1/18;A23K1/16
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摘要：
搜索關鍵詞：	一種評價生物蛋白綠盲蝽影響方法
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【說明書】：

技術領域

本發明屬于植物保護技術領域，具體地說，涉及一種評價生物蛋白對綠盲蝽影響的方法。

背景技術

盲蝽蟓是一類重要的農業害蟲，在我國主要有綠盲蝽（Apolygus?lucorum?Meyer-Dür）、中黑盲蝽（Adelphocoris?suturalis?Jakovlev）、苜蓿盲蝽（Adelphocoris?lineolatus?Goeze）、三點盲蝽（Adelphocoris?fasciaticollis?Reuter）等幾種。20世紀后半葉，我國棉田盲蝽蟓的發生數量很低，一直作為棉鈴蟲（Helicoverpa?armigera?Hübner）化學防治的兼治對象進行控制。90年代末，我國開始商業化種植轉Bt基因棉，棉鈴蟲得到了有效控制，但是作為棉田次要害蟲的盲蝽蟓的發生數量卻急劇增加，危害加重，成為當前轉Bt棉上的主要害蟲。不僅是棉田，盲蝽蟓種群暴發還波及到其他農業作物，近年來盲蝽蟓對棗、葡萄、櫻桃、茶樹等的危害也日益嚴重，已經成為影響多種作物生產的重大問題。

轉基因棉花對非靶標昆蟲的生態效應一直受到人們的廣泛關注，主要是采用田間調查的方法進行研究比較。Lu?YH等研究結果表明，Bt棉花（表達Cry1Ac蛋白）對盲椿象種群發生沒有明顯影響，Bt棉花種植后盲椿象出現區域性種群劇增、在多種作物上猖獗為害的現象，主要是由于防治棉鈴蟲化學農藥的減少使用直接導致棉田盲椿象種群上升，危害加重。目前，為了延緩棉鈴蟲、紅鈴蟲等靶標害蟲抗性的發展，轉雙價抗蟲棉花已陸續在美國等國家種植，因此準確及時的評價新型生物蛋白對綠盲蝽的影響，可為轉雙價抗蟲棉的安全性評價奠定基礎。

綠盲蝽屬于刺吸式害蟲，其取食特征與咀嚼式害蟲差異很大，而且綠盲蝽若蟲和成蟲都比較活躍，對其進行生物測定具有一定的難度；綠盲蝽的繼代飼養通常是利用新鮮的四季豆或玉米等在室內飼養，測定的蛋白通過浸泡、涂抹等只能存在于四季豆或玉米的表面，很難被綠盲蝽刺吸到。如果利用轉基因棉花等植物評價生物蛋白對綠盲蝽的影響，只能限定植物中表達的一定范圍內的蛋白濃度，難以準確評價不同蛋白濃度，尤其是高濃度蛋白對綠盲蝽的影響。因此，建立適用于不同濃度梯度生物蛋白的生物測定方法，是準確評價生物蛋白對綠盲蝽影響的關鍵，為轉基因作物的安全性評價奠定基礎。

發明內容

本發明的目的是提供一種評價生物蛋白對綠盲蝽影響的方法。

為了實現本發明目的，本發明的一種評價生物蛋白對綠盲蝽影響的方法，包括如下步驟：

1）根據生物蛋白的作用效果，將待測生物蛋白稀釋成不同濃度，與綠盲蝽人工飼料混合，制得生物蛋白測定飼料，并以不添加生物蛋白的飼料組作為對照；

2）用拉伸的封口膜分別包裹不同濃度的生物蛋白測定飼料和對照組飼料，制成大小一致的飼料膠囊；

3）將上述飼料膠囊粘在無蓋飼育盒的側壁上或置于與所述飼育盒相匹配的網架上，每個飼育盒對應于不同的生物蛋白濃度；

4）向飼育盒中接入綠盲蝽若蟲（優選1齡）若蟲或成蟲，用紗布封口，置于溫度27±2℃，濕度75±10%，光照14h，黑暗10h的條件下培養；

5）從第0天開始記錄綠盲蝽的死亡情況或體重變化。

前述方法中，步驟2）中所述封口膜大小為2.5cm×2.5cm，拉伸成6cm×8cm，在膜中央滴加0.4-0.6mL飼料。

前述方法中，所述飼育盒為無色透明燒杯，直徑4.0cm，高6.0cm。

前述方法中，步驟4）中所述紗布為150目紗網。

具體地，將綠盲蝽放入燒杯中，用細紗布和橡膠圈封口防止綠盲蝽逃逸，使其取食飼料，觀察綠盲蝽取食飼料情況，并記錄綠盲蝽的致死情況或體重抑制效果，評價生物蛋白對綠盲蝽的影響作用。