[發明專利]一種快速制備稀有人參皂甙Rd的方法

無效

• 申請號: 201310429027.8
• 申請日: 2013-09-20
• 公開（公告）號: CN103525892A
• 公開（公告）日: 2014-01-22
• 發明（設計）人: 盧丞文;殷涌光
• 申請（專利權）人: 吉林大學
• 主分類號: C12P33/20
• 分類號: C12P33/20
• 代理公司: 長春吉大專利代理有限責任公司 22201
• 代理人: 朱世林;王壽珍

技術領域

本發明涉及一種快速制備稀有人參皂甙Rd的方法，特別是涉及高壓脈沖電場耦合酶解制備方法。

背景技術

人參（Panax?ginseng?C.A.Meyer）為五加科人參屬植物，廣泛應用于醫藥學領域。人參皂甙作為人參代謝重要次級產物，具有多種藥理活性。其中稀有人參皂甙Rd屬于原人參二元醇，具有神經系統保護作用、抗癌細胞轉移、促進神經干細胞增殖、預防化學藥物引起腎損傷及阻止血管收縮等作用。

但是稀有人參皂甙Rd在人參中含量較低，含量只有千分之幾，從人參中直接提取顯然不符合實際。目前的化學合成技術步驟復雜、產率很低，也難以工業化生產。

稀有人參皂甙的化學結構與人參中某些含量高的人參皂甙如Rb1相比，只是缺少了一個或幾個糖基，因此可以通過水解某些高含量人參皂甙的糖基來獲得稀有人參皂甙。目前，用于人參皂甙糖基水解的方法主要有化學轉化法和生物轉化法。其中化學轉化法反應包括酸水解和堿水解，但存在專一性差，副產物多、產率低的缺點；生物轉化法包括微生物轉化和酶法轉化，但反應周期長，工藝復雜。本發明方法具有條件溫和、不破壞皂甙結構、操作步驟簡單、選擇性高、得率高等優點，并且采用的酶為價格低廉的商業化用酶。

發明內容

本發明的目的是提出一種高壓脈沖電場與酶耦合降解人參皂甙Rb1制備稀有人參皂甙Rd的方法，以克服目前化學法和生物法降解人參皂甙Rb1的缺點。

本發明涉及一種降解人參皂甙Rb1快速制備稀有人參皂甙Rd的方法，利用高壓脈沖電場技術耦合酶制劑降解人參皂甙Rb1制備稀有人參皂甙Rd，在常溫下將人參皂甙Rb1樣品溶解于緩沖溶液中，加入酶制劑混合均勻，直接通入高壓脈沖電場進行處理，其電場強度為5-20kV/cm，處理的脈沖數為1-10個，將高壓脈沖電場處理后的物料加入有機溶劑萃取，離心分離，取上清液，揮發除掉溶劑，即獲得人參皂甙Rd。

所述的酶制劑為纖維素酶或β-葡萄糖苷酶。

所述酶制劑添加量為1-4%。

所述緩沖溶液使用醋酸鈉-醋酸緩沖液。

所述有機溶劑使用正丁醇時用水飽和溶液。

本方法由于在酶解反應過程中引入高壓脈沖電場，提高酶活性，加速酶解反應速度，快速、高效地促進人參皂甙Rb1轉化生成稀有人參皂甙Rd。

本發明將高壓脈沖電場技術與商業化酶制劑進行耦合制備稀有人參人參皂甙Rd，具有非熱、反應速度快、副產物少、成本低等優點，為人參皂甙結構修飾提供新方法。

附圖說明

圖1人參皂甙Rb1降解生成人參皂甙Rd的反應途徑

具體實施方式

結合以下給出的實施例對本發明方法作進一步詳細說明。

實施例1

本發明將人參皂甙Rb1降解生成人參皂甙Rd的方法，是在1mM人參皂甙Rb1溶液中加入3%β-葡萄糖苷酶，混合均勻，在常溫下直接通入高壓脈沖電場進行處理，其電場強度為15kV/cm，脈沖數為8；用水飽和正丁醇萃取反應液，離心分離，上清液揮發除去溶劑，經高效液相色譜分析人參皂甙Rd的得率為91.42%。

實施例2

將人參皂甙Rb1降解生成人參皂甙Rd的方法，是在1mM人參皂甙Rb1溶液中加入3%β-葡萄糖苷酶，混合均勻，在常溫下直接通入高壓脈沖電場進行處理，其電場強度為10kV/cm，脈沖數為10；用水飽和正丁醇萃取反應液，離心分離，上清液揮發除去溶劑，經高效液相色譜分析人參皂甙Rd的得率為70.35%。

實施例3

將人參皂甙Rb1降解生成人參皂甙Rd的方法，是在1mM人參皂甙Rb1溶液中加入3%β-葡萄糖苷酶，混合均勻，在常溫下直接通入高壓脈沖電場進行處理，其電場強度為20kV/cm，脈沖數為6；用水飽和正丁醇萃取反應液，離心分離，上清液揮發除去溶劑，經高效液相色譜分析人參皂甙Rd的得率為44.52%。

實施例4

將人參皂甙Rb1降解生成人參皂甙Rd的方法，是在1mM人參皂甙Rb1溶液中加入4%β-葡萄糖苷酶，混合均勻，在常溫下直接通入高壓脈沖電場進行處理，其電場強度為20kV/cm，脈沖數為8；用水飽和正丁醇萃取反應液，離心分離，上清液揮發除去溶劑，經高效液相色譜分析人參皂甙Rd的得率為56.29%。

實施例5