[發明專利]一種篩選耐冷水稻品系的專用引物

有效

• 申請號: 201310428665.8
• 申請日: 2013-09-18
• 公開（公告）號: CN104450687B
• 公開（公告）日: 2017-06-06
• 發明（設計）人: 李自超;周雷;潘英華;張洪亮;李金杰
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司11245
• 代理人: 關暢

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種篩選耐冷水稻品系的專用引物。

背景技術

水稻是我國和世界上的主要糧食作物之一，是我國60%以上人口的主糧。全世界水稻播種面積約1.4億ｈｍ²，由于全球氣候變化異常，極端氣候發生頻繁，全世界有1500萬ｈｍ²以上的稻作受到低溫威脅。我國每年因低溫冷害損失稻谷300～500萬噸。秈稻和粳稻是亞洲栽培稻的兩個主要亞種類型，據研究表明，粳稻的耐冷性普遍強于秈稻。

我國云南地處西南高原，由于海拔高，水稻生殖生長期間晝夜平均氣溫低，自然演化了豐富的孕穗期耐冷材料。粳稻昆明小白谷在孕穗期處于17℃-18℃以下還能正常開花結實，是研究水稻孕穗期耐冷優異的遺傳資源。徐麗明的等報道了來自昆明小白谷的8個QTL能提高冷敏感品種十和田的耐冷性，進一步證明了利用從我國地方稻種中挖掘耐冷基因的可行性。

開發與篩選耐冷水稻品系及耐冷相關基因，對加速育種進度，降低育種成本，縮短育種周期，提高育種效率具有重要意義。

發明內容

本發明的目的是提供一種引物對，名稱為PB01。

本發明所提供的引物對，所述引物對具有下述核苷酸序列之一：

1）所述引物對中的一條引物的核苷酸序列為序列表中SEQ ID №：1所示的核苷酸序列，所述引物對中的另一條引物的核苷酸序列為序列表中SEQ ID №：2所示的核苷酸序列；

其中，序列表中的SEQ ID №：1由18個核苷酸組成，序列表中的SEQ ID №：2由20個核苷酸組成。

本發明的另一個目的是提供一種用于檢測耐冷相關基因的試劑盒或PCR試劑，包括所述的引物對。

本發明的還一個目的是提供一種DNA片段，是用所述引物對擴增水稻得到的。

本發明的還一個目的是提供所述引物對、所述試劑盒或PCR試劑在檢測耐冷相關基因或耐冷植物品系中的應用。

本發明的還一個目的是提供所述引物對、所述試劑盒或PCR試劑、所述DNA片段在制備檢測耐冷相關基因或耐冷植物品系試劑盒中的應用。

所述應用中，所述植物具體為水稻。

所述水稻具體為粳稻。

本發明的再一個目的是提供一種輔助鑒定待測水稻是否為耐冷水稻的方法，包括如下步驟：以待測水稻基因組DNA為模板，用所述引物對進行擴增，若所得PCR擴增產物大小為800bp，則判定所述待測水稻候選為耐冷水稻。

本發明所述的耐冷具體指某水稻品種孕穗期間在17-18℃氣溫下結實率高于冷敏感品種“十和田”的結實率；所述“十和田”的結實率為21.9%；所鑒定水稻品種處理后的結實率越高，說明耐冷性越強。

本發明提供的引物對及篩選含有特定孕穗期耐冷基因的水稻材料的方法，可應用于輔助選育抗逆水稻品種，可縮短育種周期，且成本低廉、周期短、容易推廣、易于操作。

附圖說明

圖1為利用引物PB01對20份材料進行基因型檢測的結果，其中K表示與昆明小白谷一樣的條帶，T表示與十和田一樣的條帶。

具體實施方式

下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規方法。

下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業途徑得到。

實施例1、利用專用引物PB01篩選耐冷水稻品系

（一）引物PB01的制備

人工合成下述表1所示的引物序列。

表1

將表1所示引物對命名為PB01。編號為1的引物序列可見序列表中SEQ ID №：1所示核酸序列，由18個脫氧核苷酸組成；編號為2的引物序列可見序列表中SEQ ID №：2所示核酸序列，由20個脫氧核苷酸組成。

（二）利用引物PB01篩選耐冷水稻品系的方法

以待檢測水稻（任何時期）的基因組DNA為模板，以PB01為引物進行PCR擴增，如該待測水稻的擴增產物中有大小為800bp的條帶，則該待測水稻為候選耐冷水稻品系。可通過濃度為2%瓊脂糖凝膠電泳檢測擴增產物中是否有目的條帶。

PCR擴增過程如下所述：

PCR擴增反應體系共15μl，詳見表2。

表2 PCR擴增反應體系

PCR擴增程序為：

①預變性，95℃，5分鐘；

②變性，95℃，30秒；

③退火60℃，30秒；