[發明專利]魚類蛋白質吸收相關因子的調控方法

在審

• 申請號: 201310428284.X
• 申請日: 2013-09-22
• 公開（公告）號: CN103520709A
• 公開（公告）日: 2014-01-22
• 發明（設計）人: 鐘歡;肖俊;周毅;甘西;張明;羅永巨;于凡;楊弘;唐瞻楊;郭忠寶;郭恩彥;雷燕
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區水產科學研究院
• 主分類號: A61K38/24
• 分類號: A61K38/24;C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于水產養殖技術領域，具體涉及一種魚類蛋白質吸收相關基因表達的調控方法。?

背景技術

在硬骨魚類中，腸道中氨基酸的代謝和利用分為兩個步驟。首先，蛋白質酶解，得到的氨基酸脫去氨基，轉化為中間代謝產物。隨后，中間代謝產物被合成蛋白質。氨基肽酶N(APN)和谷氨酸脫氫酶(GDH)在多肽的降解過程中發揮著重要的作用。APN參與激活氨基酸N-端的酶解反應，在小肽轉變為氨基酸的過程中表現出降解的活性。GDH能夠可逆地催化谷氨酸的去氨基反應，生產的副產物氨氣能參與氮循環。一系列的研究表明，蛋白質的降解產物，如小肽和氨基酸，被特異的轉運因子轉運到細胞內。PepT1已經被證實為肽的轉運因子，參與二肽和三肽的轉運。同時，PepT1受轉錄因子SP1和CDX2的調控。這些因子都有助于基底，腸道特異性以及禁食引起的PepT1的表達。LAT2屬于與通透相關的蛋白質，包含有12個跨膜結構域，具有轉運氨基酸跨過上皮細胞的特殊功能。這些蛋白質吸收因子的調節機制能夠幫助研究者規劃飲食，在水產和魚類育種中有潛在的應用性。?

在以前的研究中，硬骨魚類的蛋白質吸收因子的功能、機理和調節已經進行了廣泛的研究。Bakke認為在硬骨魚類中，營養物的供給、消化和吸收能夠有助于改善飲食規律和供給模式。同時，基于魚類喂養和生殖的經驗，研究者發現有助于提高生長速度的飲食習慣通常并不適合性腺發育。硬骨魚類的腸道蛋?白質的吸收屬性在很大程度上仍然不清楚。?

與其他脊椎動物相似，硬骨魚類的生殖由下丘腦-垂體-性腺軸(HPG)調控的。然而，在人工池塘中，由于垂體中LH的分泌不充足，雌性個體的生殖機能失調。作為LH的類似物，人絨毛膜促性腺激素(hCG)在魚類的催產中發揮著作用。另外，通過注射hCG來刺激魚類已經被證實為有用的手段研究在排卵過程中基因的活性。?

發明內容

本發明涉及一種鯽魚免疫相關基因表達的調控方法，其特征在于給鯽魚注射0.6-3.0IU/ghCG，其中g代表羅非魚的體重克數。?

在本發明的一個優選實施方式中，其特征在于給鯽魚注射0.6-3.0IU/g?hCG，使得免疫相關的基因如PepT1、CDX2、CREB、GDH、LAT2、APN和SP1等的表達量發生變化。?

在本發明的另一個優選實施方式中，所述的鯽魚為性成熟的雄性和雌性鯽魚。?

本發明另一方面涉及hCG的應用，所述的hCG用于提高鯽魚免疫相關基因的表達量或者在制備提高鯽魚免疫相關基因的表達量藥物中的應用，所述的免疫相關的基因選自GDH、PepT1、LAT、CDX2和/或CREB，優選地，hCG用于同時提高的GDH、PepT1、LAT、CDX2和CREB的表達量。?

在本發明的一個優選實施方式中，所述的hCG為注射劑形式。?

在本發明的一個優選實施方式中，所述的鯽魚為性成熟的雄性鯽魚，所述的hCG還用于提高APN的表達量。?

在本發明的一個優選實施方式中，所述的鯽魚為性成熟的雌性鯽魚，所述的hCG還用于提高SP1的表達量。?

在本發明的另一個優選實施方式中，所述的提高是指提高鯽魚的腸道組織中的免疫相關基因的表達量。?

附圖說明

圖1：鯽魚消化吸收相關基因表達量的檢測結果。?

具體實施方式：

下面結合實施實例對本發明進行詳細說明，但本發明并不局限于以下實例。實施例1?

實驗用魚?

性成熟的鯽魚養殖在循環水養殖箱中(26±1℃)，體長11.6±0.6cm，體重320.1±44.5克。12尾雌性成熟個體和12尾雄性成熟個體隨機的分成6組，包括有雌性對照組(n＝4)；0.6IU/g?hCG1天后注射組；0.6IU/g?hCG7天后注射組；3IU/g?hCG1天后注射組；3IU/g?hCG7天后注射組。對照組和hCG實驗組分別注射生理鹽水、0.6IU/g和3IU/g體重的hCG。每組在獨立養殖箱分開養殖，在注射后的第一天和第七天解剖收集腸道組織。在冰上解剖獲得組織后，立即放入液氮中，再保存于-80℃超低溫冰箱。?

實時定量PCR分析?