[發明專利]鐵線蓮貝蒂·里斯登的組織培養方法

有效

• 申請號: 201310428130.0
• 申請日: 2013-09-22
• 公開（公告）號: CN103461131A
• 公開（公告）日: 2013-12-25
• 發明（設計）人: 方炎明;程瑩;嚴靖;王磊
• 申請（專利權）人: 南京林業大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 南京君陶專利商標代理有限公司 32215
• 代理人: 沈根水

1.一種鐵線蓮栽培品種Clematis?‘Betty?Risdon’的組織培養方法，其特征是包括如下步驟：

1）外植體消毒處理；

2）芽誘導和芽增殖。

2.根據權利要求1所述的一種鐵線蓮栽培品種Clematis?‘Betty?Risdon’的組織培養方法，其特征是所述的步驟1）外植體消毒處理?，具體包括：

取鐵線蓮“貝蒂·里斯登”當年生的幼嫩莖節和頂芽，依次進行自來水沖洗1h，毛筆來回刷洗20次，于超凈工作臺上用質量濃度75%乙醇滅菌20?s，無菌水沖洗2次，之后用質量濃度0.1%氯化汞滅菌7?min，立即用無菌水沖洗4次；用滅菌濾紙吸干外植體表面水分，切除葉柄和兩端受傷部位，實驗統計的污染率分別為62%、49%，褐化率為24%、31%。

3.根據權利要求1所述的一種鐵線蓮栽培品種Clematis?‘Betty?Risdon’的組織培養方法，其特征是所述的步驟2）芽誘導和芽增殖，具體包括：

①誘導培養，

沖洗后將外植體置于培養皿中，用剪刀、鑷子切除葉柄、兩端受傷部位后，將芽接種于已滅菌的誘導培養基1/2?MS+NAA?0.5?mg/L+TDZ?1.0?mg/L上5周，質量濃度為3?%的蔗糖20~30?g/L，質量濃度為0.7?%的瓊脂7?g/L，pH?5.7，培養溫度25℃；光照條件：光照/黑暗，其中光照16?h/d，光照度為2400?1x；

②不定芽增殖培養，

將誘導培養基中誘導出的叢生芽分成單芽，接入1/2?MS+生長調節物質6-BA?0.2?mg/L+生長調節物質KT?0.5?mg/L+生長調節物質NAA?0.05?mg/L增殖培養基中培養4周，光照條件同①誘導培養；

③壯苗培養，

將增殖培養基中葉色濃綠、長度為2?cm左右的不定芽逐個切下，接入MS基本培養基中培養25天，光照條件同①誘導培養；

④生根培養

將壯苗培養后長勢旺盛的芽切去莖基部褐色物質后接入生根培養基1/2?MS+生長調節物質IBA?0.3?mg/L，培養6周后生根，光照條件同①誘導培養；

⑤煉苗和移栽，

將生根植株的培養瓶瓶蓋打開，室溫下煉苗6d后，取出試管苗，洗凈，移栽到由珍珠巖、蛭石、泥炭組成的苗床上，所述的珍珠巖、蛭石和泥炭間的重量比為1:1:1，保持溫度20~25℃，濕度85%~95%，適當遮蔭，成活率達90%。

4.根據權利要求3所述的一種鐵線蓮栽培品種Clematis?‘Betty?Risdon’的組織培養方法，其特征是所述的MS基本培養基是由大量元素、微量元素、鐵鹽和有機成分所組成。