[發(fā)明專利]鐵線蓮奶油的組織培養(yǎng)方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310428128.3
• 申請日: 2013-09-22
• 公開（公告）號: CN103430854A
• 公開（公告）日: 2013-12-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 方炎明;程瑩;劉暢;王磊
• 申請（專利權(quán)）人: 南京林業(yè)大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 南京君陶專利商標代理有限公司 32215
• 代理人: 沈根水

1.一種鐵線蓮栽培品種Clematis?‘Proteus’的組織培養(yǎng)方法，其特征是包括如下步驟：

1）外植體消毒處理；

2）芽誘導(dǎo)和芽增殖。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鐵線蓮栽培品種Clematis?‘Proteus’的組織培養(yǎng)方法，其特征是所述的步驟1）外植體消毒處理，具體包括：

取鐵線蓮“奶油”當年生的幼嫩莖節(jié)和頂芽，依次用自來水沖洗1?h，毛筆來回刷洗20次，于超凈工作臺上用質(zhì)量濃度為75%乙醇滅菌20?s，無菌水沖洗2次，之后用質(zhì)量濃度為0.1%氯化汞滅菌7?min，立即用無菌水沖洗4次；用滅菌濾紙吸干外植體表面水分，切除葉柄和兩端受傷部位；實驗統(tǒng)計的污染率分別為70%、64%，褐化率為25%、22%。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鐵線蓮栽培品種Clematis?‘Proteus’的組織培養(yǎng)方法，其特征是所述的步驟2）芽誘導(dǎo)和芽增殖，具體包括：

①誘導(dǎo)培養(yǎng)

將芽接種于已滅菌的誘導(dǎo)培養(yǎng)基1/2?MS+生長調(diào)節(jié)物質(zhì)NAA?0.5?mg/L+生長調(diào)節(jié)物質(zhì)TDZ?1.0?mg/L+質(zhì)量濃度為3%的蔗糖20~30?g/L?+質(zhì)量濃度為0.7%的瓊脂7?g/L，pH值為5.8，培養(yǎng)4周；培養(yǎng)溫度25℃，光照16?h/d，照度2400?1x；

②不定芽增殖培養(yǎng)

將誘導(dǎo)的叢生芽分成單芽，繼而將單芽接入1/2?MS+生長調(diào)節(jié)物質(zhì)6-BA?0.2?mg/L?+生長調(diào)節(jié)物質(zhì)KT0.5?mg/L+生長調(diào)節(jié)物質(zhì)NAA?0.05?mg/L+質(zhì)量濃度為3%的蔗糖20~30?g/L?+質(zhì)量濃度為0.7%的瓊脂7?g/L的培養(yǎng)基，pH值為5.8，培養(yǎng)4周；溫度、光照條件同①叢生芽誘導(dǎo)；

③壯苗培養(yǎng)

將增殖培養(yǎng)基中葉色濃綠、長度為1~2?cm的不定芽逐個切下，接入MS基本培養(yǎng)基中培養(yǎng)4星期，光照條件同①叢生芽誘導(dǎo)；

④生根培養(yǎng)

將壯苗培養(yǎng)后長勢旺盛的芽接入生根培養(yǎng)基1/2?MS+生長調(diào)節(jié)物質(zhì)IBA?0.5?mg/L中，培養(yǎng)40天；溫度、光照條件同①叢生芽誘導(dǎo)；

⑤煉苗和移栽

將生根的鐵線蓮“Clematis?‘Proteus’”植株的培養(yǎng)瓶瓶蓋打開，溫室下煉苗6?d后，取出試管苗，洗凈，移栽到準備好的珍珠巖：蛭石：泥炭(1:1:1)的營養(yǎng)缽中，保持濕度85%~95%，溫度、光照條件同(2)叢生芽誘導(dǎo)，成活率達95%。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種鐵線蓮栽培品種Clematis?‘Proteus’的組織培養(yǎng)方法，其特征是所述的MS基本培養(yǎng)基是由大量元素、微量元素、鐵鹽和有機成分所組成。