[發(fā)明專利]一種從灰氈毛忍冬花蕾和葉中提取純化活性成分的方法

無效

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• 申請日: 2013-09-18
• 公開（公告）號: CN103450019A
• 公開（公告）日: 2013-12-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 周興;李隆云;秦劍;李卿;宋國紅
• 申請（專利權(quán)）人: 重慶市中藥研究院
• 主分類號: C07C69/732
• 分類號: C07C69/732;C07C67/48;C07C67/58;A61K36/355;A61P1/04;A61P1/06;A61P29/00;A61P3/06;A61P9/00;A61P9/10;A61P9/12;A61K133/00;A61K127/00
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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及植物化學(xué)領(lǐng)域中化學(xué)成分的提取，更具體的說涉及一種從灰氈毛忍冬花蕾和葉中提取純化活性成分的方法。

技術(shù)背景

灰氈毛忍冬是忍冬科忍冬屬植物，具有清熱解毒，涼散風(fēng)熱的功效，常用于癰腫疔瘡，喉痹，丹毒，熱毒血痢，風(fēng)熱感冒，溫病發(fā)熱等。灰氈毛忍冬不僅是常用中藥，而且是一種“藥食同源”的綠色天然產(chǎn)物，其含有大量黃酮類化合物、綠原酸以及皂苷等活性物質(zhì)。黃酮類化合物有明顯的抗?jié)儭⒔獐d、抗炎及降血脂等系列的生物活性，其制備的制劑，對心腦血管、動脈硬化、高血壓等疾病有治療有價值且長期服用無毒副作用。綠原酸有對透明質(zhì)酸酶及葡萄糖-6-磷酸酶的抑制作用，對自由基的清除及抗脂質(zhì)過氧化作用，抗誘變作用，保肝利膽作用，抗菌、抗病毒、預(yù)防心腦血管疾病及解痙等作用。總皂苷有雙向調(diào)節(jié)免疫作用；

抗缺氧和抗疲勞作用；抗低溫應(yīng)激作用；抗脂質(zhì)氧化作用；對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用；抗致突變作用等生理活性。同時它們在衛(wèi)生保健品及化妝品行業(yè)方面也有廣闊的應(yīng)用前景。在醫(yī)藥和食品上應(yīng)用廣泛，為合理開發(fā)利用這一廢棄資源，所以從灰氈毛忍冬中提取總黃酮、綠原酸和總皂苷有很重要的意義。

現(xiàn)有提取純化灰氈毛忍冬中總黃酮、綠原酸和總皂苷的方法，如《吉首大學(xué)學(xué)報》2011年9月第32卷第5期的“金銀花葉莖藤中黃酮與綠原酸同時提取分離工藝”一文，公開的方法是：超聲輔助乙醇提取金銀花葉莖藤中的綠原酸與黃酮，乙酸乙酯萃取分離黃酮與綠原酸，D101大孔樹脂梯度洗脫綠原酸與黃酮，乙醇及正己烷分相法純化黃酮與綠原酸。該方法的主要缺點是：①使用大量有機試劑，沒有回收利用，引起嚴(yán)重的環(huán)境污染問題；②產(chǎn)品的質(zhì)量不容易得到保障，有機試劑容易有殘留；③產(chǎn)品的純度不高，雜質(zhì)較多，色澤不好等；④生產(chǎn)儀器的要求較高，提高了生產(chǎn)成本，浪費能源不環(huán)保；⑤只得到兩種產(chǎn)品，物料利用不夠充分。

呂盼等，在《成都中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報》公開了“同時分離富集細(xì)氈毛忍冬中總黃酮和綠原酸的工藝研究”其提供了一種采用聚酰胺樹脂吸附柱提取綠原酸和總黃酮的方法；依次用水、10％乙醇、30％乙醇、50％乙醇、70％乙醇梯度洗脫，最后確認(rèn)用10-30％濃度乙醇洗脫的是綠原酸，用50-70％洗脫的是總黃酮。

發(fā)明內(nèi)容

采用吸附柱提取綠原酸和總黃酮是目前工業(yè)化生產(chǎn)中的常用工藝，但是不論是大孔樹脂或者聚酰胺樹脂提取，在工業(yè)化生產(chǎn)中都涉及到一個不可回避的問題，就是柱子的活化，這需要用大量的酸液和堿液，這些廢水無害化處理難度很大，及其容易對環(huán)境造成損害。本發(fā)明提供的方法避免了吸附柱的使用；解決了植化提取對環(huán)境污染的問題。本發(fā)明的具體發(fā)明內(nèi)容是：

一種從灰氈毛忍冬花蕾和葉中提取純化活性成分的方法，采用降低綠原酸在溶劑的溶解度的方式提取綠原酸。

所述方法包括以下步驟：

1)用石油醚或汽油對灰氈毛忍冬花蕾和葉進(jìn)行脫脂處理；

2)采用乙醇提取灰氈毛忍冬花蕾和葉中的活性成分，回收提取液乙醇無醇味，得到提取水溶液；

3)靜置過濾水溶液，除去雜質(zhì)，用乙酸乙酯萃取水溶液，分別收集乙酸乙酯溶液和母液；

4)揮去母液中殘留的乙酸乙酯，加熱濃縮母液，至母液溫度高于25℃無沉淀析出，低于25℃有沉淀析出；

5)在母液中混入三氯甲烷或四氯甲烷，迅速攪拌，形成絮狀沉淀，至母液中不再產(chǎn)生白色絮狀物質(zhì)為止；

6)過濾母液中的絮狀物質(zhì)，純化結(jié)晶絮狀物質(zhì)得到綠原酸晶體。

將步驟2)得到乙酸乙酯溶液50℃濃縮成飽和溶液；將飽和溶液自然條件下冷卻至低于25℃，析出沉淀，過濾沉淀，沉淀為灰氈毛忍冬花蕾和葉的總黃酮。

所述在母液中混入三氯甲烷或四氯甲烷為，添加母液總體及大于4％的氯仿，并通過不斷的攪拌使氯仿在母液中呈混懸狀態(tài)，直至無絮狀沉淀析出。

步驟5)中所述的純化工藝為：料液比1：7在絮狀物質(zhì)中加入水HCL調(diào)pH值至3，再加入等體積的乙酸乙酯，萃取時間為4min，萃取次數(shù)為4次，合并萃取液，按分相劑／萃取液=0.4，加入正己烷分液，取下層水溶液層，0℃靜置24h，過濾；50℃，0.09Mp真空干燥晶體，時間30min，得白色晶體，為綠原酸。

本發(fā)明的有益技術(shù)效果是：本發(fā)明提供的方法的工藝成本較低，綠原酸和總黃酮提取的轉(zhuǎn)移率高，更重要的是不采用吸附柱進(jìn)行分離，工藝對環(huán)境的危害小，有利于大規(guī)模的工業(yè)化生產(chǎn)。

具體實施方式

實施例1?不同純化方法對活性成分轉(zhuǎn)移率的影響