[發(fā)明專利]檢測嘔吐型蠟樣芽孢桿菌的引物、探針及方法和試劑盒

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310425587.6
• 申請日: 2013-09-17
• 公開（公告）號: CN103451308A
• 公開（公告）日: 2013-12-18
• 發(fā)明（設計）人: 王雷;莫莎;王曉艷;張志強
• 申請（專利權）人: 北京卓誠惠生生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11;G01N21/64
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 穆宏平

1.一種用于檢測嘔吐型蠟樣芽孢桿菌的特異性引物，其特征在于，所述引物由檢測gyrB基因和ces基因的兩對引物組成；

所述檢測gyrB基因的上下游引物的核苷酸序列分別由SEQ?IDNO.3、SEQ?ID?NO.4所示；

所述檢測ces基因的上下游引物的核苷酸序列分別由SEQ?IDNO.5、SEQ?ID?NO.6所示。

2.與權利要求1所述引物配合使用的熒光探針，其核苷酸序列由SEQ?ID?NO.7、SEQ?ID?NO.8所示。

3.一種嘔吐型蠟樣芽孢桿菌的檢測方法，其特征在于，以樣品總DNA為模板，利用權利要求1所述的引物和權利要求2所述的探針進行實時熒光定量PCR，根據擴增曲線判定結果。

4.含有權利要求1所述引物和/或權利要求2所述探針的試劑盒。

5.如權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括：陽性對照、DNA聚合酶、反應體系緩沖液、Mg²⁺、dNTP和超純水。

6.如權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，其工作反應體系為：5U/μL?DNA聚合酶1-2U，10×Taq?Buffer?with(NH₄)₂SO₄（100mM?Tris-HCl(pH8.8)，750mM(NH₄)₂SO₄）2.5μL，10mM?dNTP0.5-1.5μL，25mM?MgCl₂2-5μL，引物探針混合物1.0μL，DNA模板2μL，超純水補至25μL。

7.如權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，其工作程序為：

95℃預變性10min，1個循環(huán)；95℃變性15-30s，55-62℃退火延伸30～60s，40個循環(huán)；4℃保持。