[發(fā)明專利]多重PCR檢測(cè)志賀氏菌群/血清型的引物組和試劑盒

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310425567.9
• 申請(qǐng)日: 2013-09-17
• 公開（公告）號(hào): CN103451307A
• 公開（公告）日: 2013-12-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王曉艷;王雷;王彥威;張志強(qiáng)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京卓誠惠生生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;C12Q1/10;C12N15/11
• 代理公司: 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 穆宏平

1.一種多重PCR檢測(cè)志賀氏菌群/血清型的引物組，其特征在于，其是由檢測(cè)宋內(nèi)志賀氏菌、福氏1-5型志賀氏菌、痢疾Ⅰ型志賀氏菌、福氏6型志賀氏菌和志賀氏菌屬的引物對(duì)組成；

所述檢測(cè)宋內(nèi)志賀氏菌引物對(duì)的上下游引物的核苷酸序列分別由SEQ?ID?NO.1、SEQ?ID?NO.2所示；

所述檢測(cè)福氏1-5型志賀氏菌引物對(duì)的上下游引物的核苷酸序列分別由SEQ?ID?NO.3、SEQ?ID?NO.4所示；

所述檢測(cè)痢疾Ⅰ型志賀氏菌引物對(duì)的上下游引物的核苷酸序列分別由SEQ?ID?NO.5、SEQ?ID?NO.6所示；

所述檢測(cè)志賀氏菌屬引物對(duì)的上下游引物的核苷酸序列分別由SEQ?ID?NO.7、SEQ?ID?NO.8所示；

所述檢測(cè)福氏6型志賀氏菌引物對(duì)的上下游引物的核苷酸序列分別由SEQ?ID?NO.9、SEQ?ID?NO.10所示。

2.一種對(duì)志賀氏菌群/血清型進(jìn)行多重PCR檢測(cè)的方法，其特征在于，將權(quán)利要求1所述引物組與待測(cè)樣品提取的總DNA進(jìn)行多重PCR反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后對(duì)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳分析以確定樣品是否為志賀氏菌屬并判斷志賀氏菌群/血清型。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，在進(jìn)行多重PCR反應(yīng)時(shí)，反應(yīng)體系中還加入陽性內(nèi)對(duì)照引物對(duì)。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述陽性內(nèi)對(duì)照引物對(duì)的上下游引物的核苷酸序列分別由SEQ?ID?NO.11和SEQ?ID?NO.12所示。

5.根據(jù)權(quán)利要求2-4任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述多重PCR反應(yīng)按以下步驟進(jìn)行：

a：95℃?4min；

b：95℃?30s，

c：55-68℃?30-60s，

d：72℃?30-120s，b-d循環(huán)30-35個(gè)反應(yīng)；

e：72℃?5-10min。

6.一種快速檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權(quán)利要求1所述的引物組、陽性內(nèi)對(duì)照引物對(duì)、陽性內(nèi)對(duì)照模板、DNA聚合酶、反應(yīng)體系緩沖液、Mg²⁺、dNTP和去離子水。