[發明專利]一種從城市富營養化藍藻水華水體中提取藍藻毒素的方法

有效

• 申請號: 201310424925.4
• 申請日: 2013-09-17
• 公開（公告）號: CN103543219A
• 公開（公告）日: 2014-01-29
• 發明（設計）人: 曲疆奇;張清靖;辛知明;朱華
• 申請（專利權）人: 北京市水產科學研究所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

1.一種從水體中提取藍藻毒素的方法，包括如下步驟：

（1）取待提取水體，向其中加入甲醇和冰醋酸，使甲醇的終體積含量為40%，使冰醋酸的終體積含量為3-5%，300赫茲連續超聲15-20min；

（2）將步驟（1）超聲處理后的水樣調節pH為3，用0.45μm濾膜過濾，濾液于6500g離心5-10min，取上清；

（3）將步驟（2）所得上清過固相萃取柱，用體積含量為40%的甲醇水溶液淋洗，再用體積含量為95%的甲醇水溶液洗脫，得到含有藍藻毒素的洗脫液；

（4）從步驟（3）的洗脫液中獲得藍藻毒素。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：在上述方法中，步驟（1）為如下（I）或（II）：

（I）向待提取水體中加入甲醇和冰醋酸，使甲醇的終體積含量為40%，使冰醋酸的終體積含量為3%，300赫茲連續超聲15min；

（II）向待提取水體中加入甲醇和冰醋酸，使甲醇的終體積含量為40%，使冰醋酸的終體積含量為5%，300赫茲連續超聲20min。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：步驟（1）中，在所述向待提取水體中加入甲醇和冰醋酸之前，還包括如下步驟：將所述待提取水體過100目網篩，將過篩后水樣用500g離心去沉淀。

4.根據權利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：步驟（3）中，所述固相萃取柱為C₁₈固相萃取柱。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于：所述C₁₈固相萃取柱為Cleanert?C₁₈-SPE層析柱。

6.根據權利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于：在步驟（4）中，所述從步驟（3）的洗脫液中獲得藍藻毒素的方法包括如下（a）和（b）的步驟：

（a）將所述洗脫液濃縮，得到藍藻毒素的濃縮液，所述濃縮液中的溶劑為甲醇；

（b）用高效液相色譜儀串聯質譜儀對步驟（a）所得濃縮液進行鑒定與分離，從所述濃縮液中分別得到所述RR型藍藻毒素和所述LR型藍藻毒素。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于：進行所述步驟（b）時，采用的高效液相色譜條件如下：色譜柱為C₁₈色譜柱；流動相為如下流動相A和流動相B，采用所述流動相A和所述流動相B進行梯度洗脫；流動相A：甲醇；流動相B：體積百分含量為0.1%的甲酸水溶液；所述梯度洗脫為：0～3min，所述流動相中所述流動相A和所述流動相B的體積比從30：70線性變化到75：25；4～8min，所述流動相中所述流動相A和所述流動相B的體積比為75：25；9～12min，所述流動相中所述流動相A和所述流動相B的體積比從75：25線性變化到30：70；

進行所述步驟（b）時，采用的質譜條件如下：正離子電離方式；噴霧電壓為5kV；離子化溫度為500℃；源內氣體1為N₂、壓力為55kPa；源內氣體2為N₂、壓力為55kPa；掃描方式為選擇離子模式，選擇質荷比為519.8或995.6；碰撞氣壓力為Medium級；碰撞電壓為35V或50V。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于：所述高效液相色譜條件中，流速為0.8ml/min，上樣體積為5-10μL，柱溫為30℃。

9.根據權利要求6-8中任一所述的方法，其特征在于：所述步驟（b）為：采用權利要求7或8中所述的色譜條件和質譜條件對所述濃縮液進行檢測，收集保留時間為5.14min的洗脫峰，從而實現從所述濃縮液中分離得到所述RR型藍藻毒素；收集保留時間為5.76min的洗脫峰，從而實現從所述濃縮液中分離得到所述LR型藍藻毒素。

10.根據權利要求1-9中任一所述的方法，其特征在于：所述待提取水體為藍藻水華水體。