[發明專利]廣譜復合微生物殺菌劑及其制備方法

有效

• 申請號: 201310423718.7
• 申請日: 2013-09-17
• 公開（公告）號: CN103651582A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發明（設計）人: 周劍平;祝英
• 申請（專利權）人: 周劍平;祝英
• 主分類號: A01N63/04
• 分類號: A01N63/04;A01P1/00;A01P3/00
• 代理公司: 甘肅省知識產權事務中心 62100
• 代理人: 張克勤

1.一種廣譜復合微生物殺菌劑，其特征在于：它由以下3種微生物組成原復合孢子粉：蘇云金芽孢桿菌（Bacillus?thuringiensis）GSICC?32807、解淀粉芽孢桿菌（Bacillus??amyloliquefaciens?）GSICC?32826和寡雄腐霉（Pythiumoligandrum）GSICC?61615。

2.根據權利要求1所述的廣譜復合微生物殺菌劑，其特征在于：它還含有以下成分，營養物、潤濕劑、分散劑、載體材料，各物質的重量配比為：

原復合孢子粉3%、5%-10%的營養物、5%的潤濕劑、15%的分散劑、67%-72%的載體材料，其中營養物為硝酸銨、磷酸二氫鉀和腐植酸鉀微量元素螯合劑的混合物，潤濕劑為十二烷基硫酸鈉，分散劑為木質素磺酸鈣和亞甲基雙萘磺酸鈉的混合物，載體材料為高嶺土、硅藻土或膨潤土。

3.根據權利要求2所述的廣譜復合微生物殺菌劑，其特征在于：所述硝酸銨、磷酸二氫鉀和腐植酸鉀微量元素螯合劑的質量比為5.415:2.32:10，所述木質素磺酸鈣和亞甲基雙萘磺酸鈉的質量比為1:1。

4.權利要求1所述廣譜復合微生物殺菌劑的制備方法，其特征在于它由下列步驟組成：

1）菌種活化

取權利要求1中3株菌種進行斜面培養，在室溫放置1-2天后，分別轉接到試管進行斜面培養，在25-28℃溫度下菌種復活培養基中培養3天，得到活化菌種；

2）兩種細菌孢子粉的制備

將活化好的蘇云金芽孢桿菌和解淀粉芽孢桿菌兩種菌株分別接種到一級液體種子培養基中，在28-30℃溫度、轉速為180轉/分的搖床上培養；然后轉接到二級種子搖瓶中,?在28-30℃溫度、轉速為180轉/分的搖床上培養；再轉接到細菌發酵罐培養基中，在28-30℃溫度、轉速為180轉/分的搖床上培養；將細菌發酵罐培養基的菌種輸送到生產罐中，在28-30℃溫度、轉速為180轉/分的搖床上培養，發酵2-3天，得到液體細菌懸浮液；兩種細菌懸浮液經過濃縮低溫干燥后，制備成孢子粉，含有效活菌數≥100億個/克；

3）真菌孢子粉的制備

將活化好的寡雄腐霉斜面培養菌株，接種到一級液體種子培養基中，在25-28℃溫度、轉速為200轉/分的搖床上培養，發酵2-3天；然后轉接到二級種子搖瓶中,?在25-28℃溫度、轉速為200轉/分的搖床上培養，發酵2-3天，再轉接到細菌發酵罐培養基中，在25-28℃溫度、轉速為200轉/分的搖床上培養，發酵2-3天；將細菌發酵罐培養基的菌種接種到固體發酵培養基中，發酵3-5天，形成大量孢子，將產生孢子的固體發酵培養基浸潤在無菌水中，制備孢子懸液，然后將真菌孢子懸液濃縮、低溫干燥，制成真菌孢子粉，孢子數≥1×10⁹個/g；

4）復合微生物殺菌劑產品制備

將步驟2和3得到的三種孢子粉按1:1:1的比例混合均勻后，為原復合孢子粉；按照以下比例制成復合微生物殺菌劑產品，原復合孢子粉3%，配合5%-10%的營養物，5%的潤濕劑，15%的分散劑，65%-75%的載體材料。

5.根據權利要求4所述的廣譜復合微生物殺菌劑的制備方法，其特征在于：步驟2和步驟3中蘇云金芽孢桿菌和解淀粉芽孢桿菌及寡雄腐霉斜面培養菌株的接種量為5%-10%。

6.根據權利要求5所述的廣譜復合微生物殺菌劑的制備方法，其特征在于：步驟2中蘇云金芽孢桿菌和解淀粉芽孢桿菌兩種菌株的發酵時間為2天。

7.根據權利要求6所述的廣譜復合微生物殺菌劑的制備方法，其特征在于：步驟1中菌種復活培養基配方：馬鈴薯20%，葡萄糖2%，牛肉膏0.3%，蛋白胨1%，氯化鈉0.5%，瓊脂1.5%，具體制作：取一定量的馬鈴薯，去皮、切成塊煮沸30min，然后用200目紗布過濾，再加入上述其他原料補足水，補足水，待瓊脂溶化后分裝試管，121℃滅菌30min。

8.根據權利要求7所述的廣譜復合微生物殺菌劑的制備方法，其特征在于：步驟2中液體種子培養基配方：馬鈴薯20%，葡萄糖2%，牛肉膏0.3%，蛋白胨1%，氯化鈉0.5%，具體制作：取200g去皮的馬鈴薯，切成塊煮沸30min，然后用200目紗布過濾，再加入上述其他原料補足水，121℃滅菌30min。