[發明專利]利用固定化米曲霉發酵糖蜜生產曲酸的方法

有效

• 申請號: 201310423387.7
• 申請日: 2013-09-17
• 公開（公告）號: CN103436567A
• 公開（公告）日: 2013-12-11
• 發明（設計）人: 孫衛東;李軍委;唐艷瓊;戴莉;唐湘毅
• 申請（專利權）人: 廣西大學
• 主分類號: C12P17/06
• 分類號: C12P17/06;C12N11/08;C12R1/69
• 代理公司: 廣西南寧公平專利事務所有限責任公司 45104
• 代理人: 楊立華

1.一種利用固定化米曲霉發酵糖蜜生產曲酸的方法，其特征在于以糖蜜為原料，采用固定化米曲霉發酵經酸解預處理的糖蜜。

2.根據權利要求1所述的利用固定化米曲霉發酵糖蜜生產曲酸的方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）米曲霉孢子的制備；

（2）米曲霉孢子懸浮液的制備；

（3）將米曲霉孢子固定到聚氨酯泡沫載體上；

（4）固定化米曲霉的準備；

（5）糖蜜的酸處理；

（6）固定化米曲霉接種到以糖蜜為原料的培養基中進行發酵產酸。

3.根據權利要求2所述的利用固定化米曲霉發酵糖蜜生產曲酸的方法，其特征在于步驟（1）按以下操作進行：將米曲霉孢子劃線接種到PDA試管斜面培養基上，在溫度為30℃條件下培養4天，再將米曲霉孢子劃線接種到PDA試管斜面培養基上培養，同法反復傳代3～4代活化菌種，待孢子完全覆蓋菌絲表面，即得。

4.根據權利要求3所述的利用固定化米曲霉發酵糖蜜生產曲酸的方法，其特征在于步驟（2）按以下操作進行：用無菌生理鹽水將步驟（1）獲得的米曲霉孢子洗脫下來，孢子洗脫液在超聲清洗儀中處理10s，充分打散孢子，再經4層紗布過濾除去菌絲體，將種子培養基緩慢加入到經過濾的孢子懸浮液中，使最終的孢子濃度為10⁷～10⁶個/mL，即得。

5.根據權利要求4所述的利用固定化米曲霉發酵糖蜜生產曲酸的方法，其特征在于步驟（3）按以下操作進行：采用邊長為2～6mm的正方體聚氨酯泡沫載體，高溫高壓滅菌，冷卻；將步驟（2）獲得的孢子懸浮液按體積比1∶2與固定化載體混合，反復按壓載體，使懸浮液填充載體內部；30℃條件靜置下培養24h，待孢子萌發、生長并纏繞在載體上后，用無菌生理鹽水反復沖洗3～4次，除去未固定的菌絲體，即得。

6.根據權利要求5所述的利用固定化米曲霉發酵糖蜜生產曲酸的方法，其特征在于步驟（4）按以下操作進行：按照體積比2∶5的接種量將步驟（3）獲得的固定化米曲霉添加到種子培養基中，種子培養基裝液量為100mL/250mL三角瓶，30℃條件下，200rpm搖瓶培養3～4d，形成固定化菌體，過濾，保留固定化菌體，即得。

7.根據權利要求6所述的利用固定化米曲霉發酵糖蜜生產曲酸的方法，其特征在于步驟（5）按以下操作進行：糖蜜與水按照體積比1∶1進行混合稀釋，再用質量濃度為10%的稀硫酸調節糖蜜稀釋液pH至3.0，95～100℃保溫10min，靜置過夜，取上清液；用質量濃度為15%的石灰乳回調上清液pH至6.0，40℃保溫10min，4000rpm離心10min，取上清液，備用。

8.根據權利要求7所述的利用固定化米曲霉發酵糖蜜生產曲酸的方法，其特征在于步驟（6）按以下操作進行：在三角搖瓶中進行曲酸發酵生產，發酵培養基裝液量為40～60mL/250mL，固定化菌體按照發酵培養基體積的5～15%添加，發酵溫度為28～30℃，搖床轉速為180～220rpm，發酵10天；所述發酵培養基為用水稀釋過的步驟（5）獲得的酸處理過的糖蜜，調節糖蜜中總糖濃度為60～100g/L，調節pH4.0～6.0，高溫高壓滅菌，菌體接種前，向培養基中添加一定體積的無水乙醇，使發酵培養基中的乙醇濃度達到20mL/L。

9.根據權利要求8所述的利用固定化米曲霉發酵糖蜜生產曲酸的方法，其特征在于：所述種子培養基含有蔗糖60g/L、酵母膏5g/L、KH₂PO₄1g/L、KCl0.5g/L、MgSO₄·7H₂O0.5g/L、乙醇20mL/L，pH6.0。