[發明專利]一種促進麻瘋樹再生不定芽芽條生根的方法

無效

• 申請號: 201310422701.X
• 申請日: 2013-09-16
• 公開（公告）號: CN103477987A
• 公開（公告）日: 2014-01-01
• 發明（設計）人: 劉穎;楊躍生;劉振蘭;莊楚雄;李靜;惠文凱;彭昌操;陳曉陽
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 任重

技術領域

本發明涉及植物生物技術領域，具體地，涉及一種促進麻瘋樹再生不定芽芽條生根的方法。?

背景技術

伴隨著全球對化石燃料的需求日益增長，存儲的化石燃料即將耗盡，人們越來越關注可再生的生物柴油。在可產生生物柴油的候選植物中，屬于大戟科的麻瘋樹（JatrophacurcasL.）具有明顯的優勢，它的種子含油量高，種仁含油量可達40%～60%，同時，麻瘋樹油中含有活性成分多，如毒蛋白、麻瘋酮等有著重要的農藥和醫藥價值。?

然而，大力推廣麻瘋樹的種植卻面臨一系列問題，雖然麻瘋樹種子中含油量高，但種子產量不高；種油中活性成分多，但仍需要改變油的成分才能直接替代化石燃料；麻瘋樹對環境要求較高，耐寒能力弱，分布區域較窄。麻瘋樹屬包括175個種，可以通過種間雜交引入優良性狀，但所需周期長，不能夠獲得特異的外源基因，故主要通過基因轉化改變遺傳背景。高頻率的植株再生體系是基因轉化的基礎。?

利用組織培養技術對植物進行再生或再生克隆，通常包含兩個關鍵步驟。第一步是從外植體誘導產生不定芽。第二步是促使不定芽芽條生根，以備移栽。對于麻瘋樹，現有技術中已有很多報道研究其外植體誘導產生不定芽；而至于如何促使這些不定芽芽條良好生根，則很少有人研究。?

現有技術中，迄今為止已建立起來的誘導麻瘋樹再生不定芽芽條生根的方法一般都是在生根培養基中不添加激素或者只添加一定濃度的生長素，現有方法存在生根效率低、再生不定根的質量較差、所獲得再生植株生長狀態不佳、整個培養周期較長等缺點，難以滿足實際應用的需要。?

L-谷氨酰胺是一種條件必需性氨基酸，在生命活動中起著重要作用。它是構成蛋白質的氨基酸，又是合成含氮生物物質的氮源，與組織生長和修補有著密切的關系。在不同組織中谷氨酰胺具有不同的代謝作用，起著重要的生理作用。目前僅有一篇論文報道稱，L-谷氨酰胺對石斛蘭的生根有負面影響，在培養基中添?加16mg/L的谷氨酰胺對石斛蘭的生根和生長起抑制作用。?

發明內容

本發明為了克服現有技術麻瘋樹不定芽芽條生根率低、生根質量差、培養周期長的缺陷，提供一種促進麻瘋樹不定芽芽條生根的方法。采用本方法可以在較短時間內就使得再生不定芽芽條的生根率達到較高值，因此可顯著縮短再生培養周期；同時減少了生根過程中常見的再生植株葉片發黃現象，提高了所獲得再生植株的質量，使麻瘋樹相關生物技術育種的工作效率得到相應的大幅度的提高。?

本發明通過以下技術方案予以實現上述目的：?

一種促進麻瘋樹再生不定芽芽條生根的方法，將不定芽芽條接種在含有4～32mg/LL-谷氨酰胺的生根培養基上培養10～40天。?

所述L-谷氨酰胺母液的配制方法為：準確稱取一定量的L-谷氨酰胺粉末，用去離子水充分溶解后，再用去離子水定容，配制成2mg/mL的L-谷氨酰胺母液。使用前用0.22微米的水系濾膜對已配制好的L-谷氨酰胺母液進行過濾滅菌。使用時，再通過加入無菌水將L-谷氨酰胺母液配置成4、8、16、32、64、128mg/L的L-谷氨酰胺工作液。?

所述不定芽芽條的獲取方法為：從培養瓶中取出具有長度大于1cm且至少有2個伸展葉片的不定芽的外植體，用滅過菌的手術刀對伸長的再生不定芽進行橫向切割（切割的方向與伸長的再生不定芽的中軸相垂直，切口要平齊），切去其他部分，獲取長度約為1cm的不定芽芽條。?

優選地，將不定芽芽條接種在含有8～32mg/LL-谷氨酰胺的生根培養基上培養10～40天。?

更優選地，將不定芽芽條接種在含有16mg/LL-谷氨酰胺的生根培養基上培養10天或將不定芽芽條接種在含有8～32mg/LL-谷氨酰胺的生根培養基上培養20～40天。?

最優選地，將不定芽芽條接種在含有16mg/LL-谷氨酰胺的生根培養基上培養10～40天。?

優選地，所述接種的方式為豎插方式，即使芽條的中軸與培養基表面相垂直，芽條的形態學下端插入培養基中的深度為0.2～0.4cm。?

優選地，所述培養的條件為光照強度為2000～2500lx，光照時間為12～16?小時/天，培養溫度為25±1℃。?

優選地，所述生根培養基還含有0.3mg/L吲哚丁酸，30g/L蔗糖，100mg/L肌醇，5g/L瓊脂和大量元素減半的MS培養基成分。?

本發明的有益效果：?