[發(fā)明專利]一種測定微藻單藻落脂肪酸成分構(gòu)成的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310422373.3
• 申請日: 2013-09-16
• 公開（公告）號: CN104458982A
• 公開（公告）日: 2015-03-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 薛松;劉亞男;曹旭鵬;艾江寧
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/06
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標(biāo)代理有限公司 21002
• 代理人: 馬馳

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于能源微藻領(lǐng)域，具體的說是一種以微藻單藻落為原料的微量快速分析其脂肪酸成分構(gòu)成方法。

背景技術(shù)

目前，中國經(jīng)濟(jì)的高速發(fā)展令世人矚目，但是，環(huán)境污染和能源不足對中國經(jīng)濟(jì)持續(xù)高速發(fā)展的負(fù)面影響也越來越凸顯。在能源方面。我國化石能源，特別是石油儲量不足，不僅制約經(jīng)濟(jì)高速發(fā)展，甚至危害到國家能源安全。

微藻作為重要的生物能源原料，具有生物量大、生長周期短、易培養(yǎng)以及含有較高的脂類物質(zhì)等優(yōu)點，不僅在大氣CO₂的循環(huán)利用中起著重要作用，而且還是制備生物質(zhì)液體燃料的良好材料，具有廣闊的開發(fā)和利用前景。

脂肪酸作為能源微藻的一種重要產(chǎn)物，無論是在藻種篩選還是在微藻的培養(yǎng)過程中，其含量的積累和變化都為進(jìn)一步的研究開發(fā)提供理論依據(jù)和技術(shù)參數(shù)。

對于微藻脂肪酸的測定，目前還沒有標(biāo)準(zhǔn)方法，大多數(shù)的方法是用有機(jī)溶劑提取濃縮后得到的微藻粗脂肪，再對粗脂肪進(jìn)行皂化和甲酯化，用有機(jī)溶劑提取，最后用GC來測定脂肪酸的含量。但是現(xiàn)有方法大都操作復(fù)雜、處理時間長，不適合快速檢測。因此，快速、簡便、準(zhǔn)確的測定脂肪酸成分構(gòu)成，是今后一段時間的研究熱點。本方法即針對這一問題，開展微藻脂肪酸快速測定方法研究，以期為其應(yīng)用提供前期基礎(chǔ)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種快速檢測微藻中脂肪酸成分構(gòu)成的方法，本方法與傳統(tǒng)常用的微藻脂肪酸提取制備方法比較，具有操作步驟簡單、快速等優(yōu)點。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為：

取一個微藻的單藻落或等量微藻樣品（約0.01-5mg），加入1ml的飽和KOH-CH₃OH溶液，對單藻落樣品進(jìn)行皂化和甲酯化，在充分混合震蕩作用后，加入1ml正己烷，萃取得到的脂肪酸甲酯，即可進(jìn)行氣相色譜分析。

具體步驟如下：

（1）脂肪酸的甲酯化：

取一個微藻的單藻落或等量微藻樣品（約0.01-5mg），將其加入1ml的飽和KOH-CH₃OH溶液，超聲清洗輔助震蕩反應(yīng)5min，再加入1ml正己烷，震蕩萃取，靜置后得到己烷層即為脂肪酸甲酯，可進(jìn)行氣相色譜分析；

（2）脂肪酸的氣相色譜檢測條件：

a、色譜柱：DB-23毛細(xì)管柱（30m×0.32mm×0.25μm）；

b、載氣：氮氣，流速為0.6ml/min，進(jìn)樣口溫度270℃，F(xiàn)ID檢測器，檢測器溫度280℃；

c、升溫程序為：初溫130℃，5℃/min升至170℃，再以3℃/min升溫至220℃，保持10min；

d、分流比為10:1，分流進(jìn)樣，進(jìn)樣量1μL；

e、脂肪酸成分構(gòu)成，定性由與標(biāo)準(zhǔn)品的保留時間對照來確定，成分構(gòu)成由各組分對應(yīng)峰面積歸一化計算得來。

同時，本發(fā)明除了應(yīng)用在單藻落的脂肪酸成分分析，還可以應(yīng)用在與單藻落等量的微藻樣品中，如可以將0.01-5mg的藻粉使用同樣的方法進(jìn)行轉(zhuǎn)酯化反應(yīng)，即可快速的得到其脂肪酸成分結(jié)果。這樣便可以將此方法應(yīng)用于培養(yǎng)過程的在線監(jiān)測。

本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下優(yōu)點：

1.樣品用量極少，可實現(xiàn)微藻培養(yǎng)過程監(jiān)控；

2.無需制備干燥藻粉；

3.無需提取藻種油脂，減少了操作步驟；

4.縮短樣品甲酯化時間，最快可在0.5小時內(nèi)完成檢測，大大的節(jié)省了時間成本。

具體實施方式

下面通過具體實施例對本發(fā)明方法和結(jié)果進(jìn)行說明。

使用氣相色譜對其脂肪酸甲酯成分進(jìn)行分析。

a、色譜柱：DB-23毛細(xì)管柱（30m×0.32mm×0.25μm）；

b、載氣：氮氣，流速為0.6ml/min，進(jìn)樣口溫度270℃，F(xiàn)ID檢測器，檢測器溫度280℃；

c、升溫程序為：初溫130℃，5℃/min升至170℃，再以3℃/min升溫至220℃，保持10min；

d、分流比為10:1，分流進(jìn)樣，進(jìn)樣量1μL；

e、脂肪酸成分構(gòu)成，定性由與標(biāo)準(zhǔn)品的保留時間對照來確定，成分構(gòu)成由各組分對應(yīng)峰面積歸一化計算得來。