[發明專利]一種黃姜皂素清潔生產方法

有效

• 申請號: 201310422041.5
• 申請日: 2013-09-16
• 公開（公告）號: CN103497987A
• 公開（公告）日: 2014-01-08
• 發明（設計）人: 舒國偉;楊輝;陳合;王旭;張璐
• 申請（專利權）人: 陜西科技大學
• 主分類號: C12P33/20
• 分類號: C12P33/20;A23K1/14;A23K1/16
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司 61200
• 代理人: 徐文權

1.一種黃姜皂素清潔生產方法，其特征在于，包括如下步驟：

1）將黃姜粉碎，然后過濾獲得纖維渣和濾出物；將濾出物靜置分為三層，上層為上清液，中層為懸濁液，下層為淀粉；倒出上清液備用；分離出下層淀粉并洗滌，將淀粉洗滌后的洗液并入懸濁液中得到懸浮液；

2）將懸浮液離心后得到懸浮液沉淀和懸浮液清液，將懸浮液清液用截留分子量為700Dalton的納濾膜進行膜分離得到含薯蕷皂苷的保留液；將保留液與懸浮液沉淀混合，并調整得到固形物含量為4-6%的混合液，按比例在每100ml混合液中加入6-8ml蒺藜提取液、0.2-0.3g乙酸鈉、0.3-0.5g檸檬酸氫二銨和0.008-0.012ml吐溫80及0.4-0.6g酪蛋白水解物得到發酵培養基，將發酵培養基的pH值調至5.0-6.0，滅菌冷卻后按發酵培養基體積的5-8%接種量接入嗜酸乳桿菌，在34-38℃下發酵培養2-3d進行生物轉化將薯蕷皂苷為皂素；

3）將發酵結束后得到的發酵液的pH值調至6.5-7.5，然后離心分離得到發酵液清液和發酵液沉淀；將發酵液沉淀在50-60℃烘干，加入乙醇進行提取皂素后抽濾得到抽濾液和殘渣；

4）用石油醚反復萃取抽濾液，靜置分層，合并石油醚層，再濃縮結晶后得到黃姜皂素。

2.根據權利要求1所述的一種黃姜皂素清潔生產方法，其特征在于，步驟1）中采用80-100目的濾布進行過濾，濾出物靜置5-6h后分成三層。

3.根據權利要求1所述的一種黃姜皂素清潔生產方法，其特征在于，步驟2）中懸浮液離心時的轉速為3000-4000r/min，離心時間為10-15min；滅菌時的溫度為121℃，滅菌時間20-30min。

4.根據權利要求1所述的一種黃姜皂素清潔生產方法，其特征在于，步驟3）中發酵結束后用0.75-1.25mol/L的NaOH溶液調節發酵液的pH值。

5.根據權利要求1所述的一種黃姜皂素清潔生產方法，其特征在于，步驟3）中發酵液離心分離時的轉速為5000-7000r/min，離心時間為10-15min。

6.根據權利要求1所述的一種黃姜皂素清潔生產方法，其特征在于，步驟3）中對發酵液沉淀提取時，加入沉淀量2-4倍的乙醇提取3-4h完成皂素提取。

7.根據權利要求1所述的一種黃姜皂素清潔生產方法，其特征在于，步驟3）中將發酵液清液經截留分子量為700Dalton的納濾膜進行膜分離得到含未轉化的薯蕷皂苷的保留液，回收保留液用于下一次黃姜皂素生產時，步驟2）中的生物轉化。

8.根據權利要求1所述的一種黃姜皂素清潔生產方法，其特征在于，步驟4）中用抽濾液體積1/3-1/2的石油醚反復萃取抽濾液至少3次。

9.根據權利要求1所述的一種黃姜皂素清潔生產方法，其特征在于，還包括對將步驟1）中得到的纖維渣和洗滌后的黃姜淀粉的加工處理，處理包括如下步驟：

a.在纖維渣中加入質量分數分別為15-25%的麥麩、0.5-1.5%的硫酸銨和體積質量分數為0.08-0.12%的吐溫80，并攪拌均勻，然后滅菌冷卻到30-40℃再按體積質量分數為8-12%的接種量接入綠色木霉，恒溫培養后，得到含纖維素酶和菌體蛋白的黃姜纖維渣；

b.將黃姜淀粉用步驟1）中得到的上清液進行調漿，經液化、糖化獲得黃姜淀粉的酶解液，將酶解液降溫后，按比例在每升酶解液中加入8-12g的(NH₄)₂SO₄、3-7g的蛋白胨、2.0-4.0g的無水乙酸鈉、4-8g的檸檬酸氫二銨、0.8-1.2mL的吐溫80、0.2-0.4g的硫酸鎂、0.05-0.08g的硫酸錳和3.0-5.0g的磷酸氫二鉀，攪拌均勻并調節pH值至5.5-6.5后得到酶解培養液，滅菌冷卻后按比例在每100ml酶解培養液中接入3-5ml保拉迪酵母和5-7ml嗜酸乳桿菌，發酵后通過固液分離得到益生菌菌泥；

c.將益生菌菌泥添加到含纖維素酶和菌體蛋白的黃姜纖維渣中，混合均勻并低溫烘干后得到黃姜活性飼料。

10.根據權利要求9所述的一種黃姜皂素清潔生產方法，其特征在于，步驟a中滅菌時的溫度為121℃，滅菌時間20-30min；恒溫培養時的溫度為27-33℃，時間為3-5d；步驟b中滅菌時的溫度為121℃，滅菌時間20-25min；發酵時的溫度為33-39℃，發酵時間為48-60h。