[發(fā)明專利]一種篩選血管內(nèi)皮生長因子1激酶抑制劑高通量篩選方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310421211.8
• 申請日: 2013-09-12
• 公開（公告）號: CN104458674A
• 公開（公告）日: 2015-03-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 嚴(yán)明;張陸勇;胡潔;高鵬
• 申請（專利權(quán)）人: 中國藥科大學(xué)
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種血管內(nèi)皮生長因子1激酶抑制劑高通量篩選模型，其特征在于，包括步驟：?

(1)激酶抑制劑篩選模型的建立與優(yōu)化；?

(2)陽性藥驗(yàn)證模型可靠性；?

(3)高通量篩選模型驗(yàn)證。?

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的激酶為血管內(nèi)皮生長因子1激酶。?

3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)中進(jìn)行血管內(nèi)皮生長因子1激酶濃度梯度、溫孵時間、底物濃度、ATP濃度實(shí)驗(yàn)。?

4.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，由步驟(1)可得到最佳反應(yīng)所需的血管內(nèi)皮生長因子1激酶濃度為0.2ng／μl，最佳溫孵時間為60min，最佳底物濃度為148.8nM，最佳ATP濃度為1.1μM。

5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)選用步驟(1)所到的合適濃度的激酶，ATP?Km，底物Km；將激酶和底物按1：2體積混合，每孔加入4μl，再按濃度梯度每孔加入4μl陽性藥，最后每孔加入2μl?ATP開始反應(yīng)，按優(yōu)化時間室溫孵育；配制SA-XL665和TK-Ab，將SA-XL665和TK?Ab按體積比1：1混合，每孔加入10μl終止反應(yīng)，室溫孵育1小時后檢測，分析數(shù)據(jù)得陽性藥半數(shù)抑制率IC₅₀為14.18nM。?

6.權(quán)利要求1-5中所述任一方法在篩選血管內(nèi)皮生長因子1激酶抑制劑的應(yīng)用。?