[發明專利]一種酸性蛋白酶鹽析效果的檢測方法

有效

• 申請號: 201310421199.0
• 申請日: 2013-09-16
• 公開（公告）號: CN103468780A
• 公開（公告）日: 2013-12-25
• 發明（設計）人: 李永其
• 申請（專利權）人: 張家港市金源生物化工有限公司
• 主分類號: C12Q1/34
• 分類號: C12Q1/34;C12N9/50
• 代理公司: 張家港市高松專利事務所(普通合伙) 32209
• 代理人: 孫高

技術領域

本發明涉及一種酸性蛋白酶鹽析效果的檢測方法。

背景技術

目前國內酶制劑產品有固體劑型和液體劑型，其中，固體劑型生產工藝用鹽析法把酶從液體中取出，鹽析用原料有硫酸鈉和硫酸銨，不同酶制劑品種添加的硫酸鈉比例也不一樣，為達到最佳效果，一般酶制劑都是通過檢測酶發酵液鹽析過濾后的濾液中該酶的含量確定鹽析效果，通過研究發現，由于酸性蛋白酶的特殊性，酸性蛋白酶鹽析后檢測效果時無法測出濾液中酸性蛋白酶的真實活力，這樣就會因酸性蛋白酶發酵液中的泡沫、鹽析劑的質量等原因影響酸性蛋白酶的鹽析效果時無法檢測出來，從而導致生產中影響到酸性蛋白酶收率，造成收率低和不穩定。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是：提供一種能使酸性蛋白酶收率穩定且收率高的酸性蛋白酶鹽析效果檢測方法。

為了解決上述技術問題，本發明的技術方案為:一種酸性蛋白酶鹽析效果的檢測方法，利用酸性蛋白酶發酵液中含有的糖化酶活性，通過測定鹽析液中糖化酶的含量來確定酸性蛋白酶的鹽析效果，當糖化酶的含量≤3u/mL（1g固體酶粉（或1mL液體酶），于40℃、pH=4.6條件，1h分解可溶性淀粉產生1mg葡萄糖，即為1個酶活力單位，以u/mL表示）時，酸性蛋白酶析出率＞99.9%（效果最佳）。

本發明所要解決的第二個技術問題是，提供一種酸性蛋白酶鹽析方法。

為解決第二個技術問題，本發明采用的技術方案是：酸性蛋白酶鹽析方法，其具體步驟為：

1）酸性蛋白酶發酵液中加入鹽析劑，攪拌溶解，沉淀8±0.5小時；

2）將沉淀后的酸性蛋白酶鹽析液過濾；

3）檢測步驟2）所得濾液中的糖化酶的含量，當糖化酶的含量≤3u/mL，酸性蛋白酶析出率＞99.9%（效果最佳）。

所述的濾液中糖化酶的含量，采用QB/T1803-1993中糖化酶測定方法檢測。

所述的鹽析劑為硫酸鈉或硫酸銨。

本發明的有益效果：本發明通過檢測濾液中含有的糖化酶含量，確定酸性蛋白酶鹽析有沒有達到要求的效果，通過本發明公開的技術方案，使得鹽析效果能夠達到最佳，保證了酸性蛋白酶的高收率及穩定性；同時，由于鹽析效果的檢測方法明確后，避免了鹽析時過量加入鹽析劑，從而節省了鹽析原料，降低了生產成本。

具體實施方式

下面結合具體實施例詳細描述一下本發明的具體內容。

實施例1

取發酵活力為7100u/mL的酸性蛋白酶發酵液，分別做鹽析比例（體積重量比）為30%、32%、33%、34%、35%鹽析試驗，其中35%為規定的最佳鹽析比例，分別加入鹽析劑充分溶解后沉淀8小時，用濾紙進行過濾，濾液分別測酸性酸性蛋白酶活力和糖化酶活力，結果如下：

表一：（酶活力單位：u/mL）