[發(fā)明專利]一種引發(fā)強(qiáng)效CD4+ T細(xì)胞免疫反應(yīng)的新型HIV疫苗

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310419864.2
• 申請日: 2013-09-13
• 公開（公告）號(hào): CN103480003A
• 公開（公告）日: 2014-01-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫彩軍;陳凌;靳怡
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院
• 主分類號(hào): A61K48/00
• 分類號(hào): A61K48/00;A61K39/21;A61P31/18
• 代理公司: 廣州嘉權(quán)專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 44205
• 代理人: 鄭瑩

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種疫苗，特別涉及一種引發(fā)強(qiáng)效CD4+?T細(xì)胞免疫反應(yīng)的新型HIV疫苗。

背景技術(shù)

自1984年發(fā)現(xiàn)艾滋病（Acquired?Immune?Deficiency?Syndrome,?AIDS）至今，30年中，在艾滋病的治療與預(yù)防方面，取得了極大的進(jìn)步。然后，艾滋病仍然是全球威脅人民健康的最嚴(yán)重的疾病之一。截至2012年底，全球有約3400萬的人感染艾滋病，累計(jì)死亡人數(shù)超過3000萬。

目前為止，還未見有效的HIV疫苗應(yīng)用于臨床。一直以來，HIV誘發(fā)的特異性的細(xì)胞免疫反應(yīng)，尤其是CD8+?T細(xì)胞免疫反應(yīng)被認(rèn)為是主要控制HIV病毒復(fù)制。因此，很多HIV疫苗的設(shè)計(jì)都是基于此點(diǎn)，誘發(fā)更強(qiáng)烈的CD8+?T?細(xì)胞反應(yīng)以降低病毒載量。然而STE，Phambili，HVTN505等臨床試驗(yàn)的失敗表明：僅靠誘發(fā)強(qiáng)的CD8+?T?細(xì)胞反應(yīng)來預(yù)防或者控制HIV是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠的。在經(jīng)歷了數(shù)次的臨床失敗后，近年來，對于HIV疫苗的CD4+?T淋巴細(xì)胞反應(yīng)逐漸受到關(guān)注，或許誘發(fā)強(qiáng)烈，多功能性的CD4+?T淋巴細(xì)胞免疫反應(yīng)是HIV疫苗發(fā)展的另一個(gè)方向。

均衡的CD4+?T細(xì)胞和CD8+?T細(xì)胞免疫反應(yīng)或許可以更好的控制HIV。?STEP，Phambili，HVNT505失敗的原因之一很有可能就是基于5型腺病毒（Ad5）載體的HIV疫苗誘發(fā)了強(qiáng)的CD8+?T細(xì)胞免疫反應(yīng)而相對弱的CD4+?T細(xì)胞反應(yīng)。在泰國進(jìn)行的一項(xiàng)HIV疫苗三期臨床試驗(yàn)（RV144）有效的預(yù)防了HIV病毒，這是首次在臨床水平證實(shí)HIV疫苗具有保護(hù)性。RV144試驗(yàn)中所誘發(fā)的CD4+?T細(xì)胞反應(yīng)主要是針對于HIV-1?env的V2區(qū)，而且高水平的針對V1V2區(qū)的抗體很有可能能夠有效的抑制或抵抗HIV-1病毒的感染。RV144試驗(yàn)表明誘發(fā)強(qiáng)的HIV特異性的CD4+?T細(xì)胞免疫反應(yīng)對HIV疫苗的效果的發(fā)揮有重要的作用。

在哺乳動(dòng)物中，LC3蛋白有3種形式：LC3a，LC3b，LC3c。可合成微管相關(guān)蛋白1輕鏈（microtuble?associated?protein?1?light?chain?3，MAP1LC3b，LC3b?）有2種形式，LC3b-I和LC3b-II。LC3-I游離于細(xì)胞質(zhì)中，和磷脂酰乙醇胺(PE)結(jié)合，形成LC3b-II。LC3b-II是唯一的已知的可以特異性的定位在自噬體膜上的蛋白。當(dāng)發(fā)生自噬的時(shí)候，在胞質(zhì)中，游離的LC3b-I就會(huì)轉(zhuǎn)化為LC3b-II，LC3b-II共價(jià)結(jié)合與自噬體的膜上，從而形成自噬體完整的膜結(jié)構(gòu)。LC3b-II也是自噬體發(fā)生的Marker。有研究報(bào)道，將流感蛋白MP1與LC3b融合從而通過自噬途徑把MP1遞呈至CD4?T細(xì)胞識(shí)別，提高CD4+?T細(xì)胞免疫反應(yīng)。但是，未有文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)這種遞呈作用具有普遍性。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種HIV疫苗。

本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是：

一種HIV疫苗，疫苗含有HIV目的抗原基因與LC3基因的融合基因，HIV目的抗原基因選自HIV?gag、env、pol、nef、vif、tat、vpr、vpx、rev。

作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，LC3基因?yàn)長C3b基因。

作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，疫苗的載體為質(zhì)粒或病毒。

作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，疫苗的載體為質(zhì)粒pVAX載體或腺病毒AD5載體。

作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，將HIV目的抗原基因與LC3基因融合，使表達(dá)出的融合蛋白中，HIV目的抗原與LC3蛋白的N端融合。

本發(fā)明的有益效果是：

動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，通過融合LC3b到SIVgag蛋白，可以誘發(fā)更加強(qiáng)烈，廣譜，多功能性的CD4+?T淋巴細(xì)胞反應(yīng)。并且，這種方法是安全可行的。本發(fā)明的疫苗可以普遍用于預(yù)防和治療艾滋病。

附圖說明

圖1是攜帶SIVgag-LC3b的DNA載體和Ad5載體的構(gòu)建；圖1A是攜帶有的LC3b，SIVgag，SIVgag-LC3b的示意圖，圖1B是用western-blot方法檢測重組pVAX載體蛋白表達(dá)水平的檢測，分別使用Anti-SIVgag和Anti-LC3b抗體；圖1C是用western-blot的方法檢測重組腺病毒蛋白水平的檢測；

?圖2是靶向SIVgag到自噬體的細(xì)胞定位圖；

?圖3是靶向SIVgag到溶酶體（圖3A）和MIICs的細(xì)胞定位圖（圖3B）；